| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-33页 |
| 一、蛋白质组学中的翻译后修饰研究概述 | 第10-14页 |
| 1.1 蛋白质组学的基本概念 | 第10-11页 |
| 1.2 蛋白质组学中的翻译后修饰研究 | 第11-14页 |
| 二、乙酰化翻译后修饰研究进展 | 第14-20页 |
| 2.1 组蛋白的乙酰化研究 | 第14-18页 |
| 2.1.1 乙酰化转移酶和其抑制剂 | 第15-16页 |
| 2.1.2 去乙酰化转移酶和其抑制剂 | 第16-18页 |
| 2.2 非组蛋白的乙酰化研究 | 第18-20页 |
| 三、微流控芯片技术概述 | 第20-25页 |
| 3.1 微流控芯片基本概念 | 第20页 |
| 3.2 微流控芯片的材料及制作 | 第20-22页 |
| 3.2.1 微流控芯片的材料 | 第20-21页 |
| 3.2.2 微流控芯片的制作技术 | 第21-22页 |
| 3.3 微流控芯片的表面修饰 | 第22-24页 |
| 3.4 微流控芯片在生化分析中的应用 | 第24-25页 |
| 四、肝癌和肝癌转移研究概述 | 第25-26页 |
| 4.1 肝癌及肝癌转移的概念 | 第25页 |
| 4.2 肝癌及肝癌转移的蛋白质组学研究 | 第25-26页 |
| 五、本论文选题目的及意义 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 肝癌细胞组蛋白H3乙酰化修饰的定量研究 | 第33-56页 |
| 一、研究背景 | 第33-34页 |
| 二、实验部分 | 第34-39页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 组蛋白提取 | 第34页 |
| 2.1.2 SDS-PAGE相关 | 第34页 |
| 2.1.3 免疫印记相关 | 第34-35页 |
| 2.1.4 甲基化定量相关 | 第35页 |
| 2.1.5 酶解和质谱相关 | 第35页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.2.1 组蛋白提取 | 第35-36页 |
| 2.2.2 蛋白质含量测定 | 第36页 |
| 2.2.3 电泳及染色 | 第36-37页 |
| 2.2.4 免疫印迹 | 第37-38页 |
| 2.2.5 组蛋白H3分子量测定及组蛋白H3收集 | 第38页 |
| 2.2.6 组蛋白H3的溶液酶解和甲基化定量 | 第38页 |
| 2.2.7 标记肽段的分离与鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.8 数据检索 | 第39页 |
| 三、结果与讨论 | 第39-53页 |
| 3.1 293T细胞组蛋白H3的提取及鉴定 | 第39-41页 |
| 3.2 肝癌细胞株组蛋白H3的提取 | 第41-42页 |
| 3.3 组蛋白H3分子量测定及组蛋白H3收集 | 第42-44页 |
| 3.4 甲基化同位素标记在基于质谱的相对定量中的表现 | 第44-46页 |
| 3.5 甲基化同位素标记组蛋白在LC-LTQ-Orbitrap路线中的稳定性 | 第46-47页 |
| 3.6 五种细胞系组蛋白H3乙酰化位点的定量分析 | 第47-53页 |
| 3.6.1 肝细胞L02和肝癌细胞HepG2中组蛋白H3乙酰化位点定量 | 第47-50页 |
| 3.6.2 肝癌细胞HepG2和肝癌转移细胞97H中组蛋白H3乙酰化位点定量 | 第50-51页 |
| 3.6.3 不同转移潜能肝癌细胞系97L和LM3中组蛋白H3乙酰化位点定量 | 第51-52页 |
| 3.6.4 五种细胞系组蛋白H3乙酰化位点的定量结果对比分析 | 第52-53页 |
| 四、结论与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第三章 基于微流控芯片的抗体固定技术 | 第56-76页 |
| 一、研究背景 | 第56-57页 |
| 二、实验部分 | 第57-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 2.1.1 生化试剂 | 第57-58页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第58页 |
| 2.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 2.2.1 乙酰化BSA的合成 | 第58页 |
| 2.2.2 蛋白质含量测定 | 第58-59页 |
| 2.2.3 电泳及染色 | 第59-60页 |
| 2.2.4 免疫印迹 | 第60页 |
| 2.2.5 微芯片制备 | 第60-61页 |
| 2.2.6 微流控芯片固定抗体 | 第61页 |
| 2.2.7 原子力显微镜表征Protein A/G修饰的PDMS芯片 | 第61页 |
| 2.2.8 乙酰化蛋白和肽段的富集 | 第61页 |
| 2.2.9 胶上酶解及肽段提取 | 第61-62页 |
| 2.2.10 MALDI-TOF MS鉴定 | 第62页 |
| 三、结果与讨论 | 第62-72页 |
| 3.1 乙酰化BSA的合成及鉴定 | 第62-64页 |
| 3.2 微流控芯片固定抗体 | 第64-65页 |
| 3.3 Protein A/G修饰的PDMS芯片表面的表征 | 第65页 |
| 3.4 微流控芯片固定抗体反应条件的优化 | 第65-66页 |
| 3.5 固定抗体的芯片用于乙酰化蛋白的富集 | 第66-70页 |
| 3.5.1 富集条件的优化 | 第67-69页 |
| 3.5.2 与常用免疫沉淀法的比较 | 第69-70页 |
| 3.6 固定抗体的芯片用于乙酰化肽段的富集 | 第70-72页 |
| 四、结论和展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
