| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-16页 |
| 2 文献综述 | 第16-34页 |
| 2.1 水稻与氮素的关系 | 第16-21页 |
| 2.1.1 氮素对水稻生产的重要作用 | 第16-17页 |
| 2.1.2 氮肥利用现状 | 第17-18页 |
| 2.1.3 水稻N素吸收的特点 | 第18-20页 |
| 2.1.4 水稻N代谢营养途径 | 第20-21页 |
| 2.2 水稻硝态氮的研究 | 第21-27页 |
| 2.2.1 水稻根际土壤中的硝态氮 | 第22-23页 |
| 2.2.2 硝态氮对水稻生长发育的影响 | 第23-25页 |
| 2.2.3 水稻根系吸收硝态氮特点 | 第25-27页 |
| 2.3 植物硝酸盐营养的研究进展 | 第27-32页 |
| 2.3.1 硝酸盐信号途径 | 第28-29页 |
| 2.3.2 NO_3~-参与的根信号途径 | 第29-30页 |
| 2.3.3 拟南芥ANR1基因的研究 | 第30-32页 |
| 2.4 植物生长与磷、硫的关系 | 第32-34页 |
| 2.4.1 磷与植物的生长发育 | 第32-33页 |
| 2.4.2 硫与植物的生长发育 | 第33-34页 |
| 3 ANR1水稻同源基因的克隆 | 第34-57页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-48页 |
| 3.1.1 试验材料与生化试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.1.1 试验材料 | 第34页 |
| 3.1.1.2 菌株 | 第34页 |
| 3.1.1.3 质粒 | 第34页 |
| 3.1.1.4 酶及试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第35-48页 |
| 3.1.2.1 序列分析 | 第35页 |
| 3.1.2.2 植物RNA提取 | 第35-36页 |
| 3.1.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第36页 |
| 3.1.2.4 引物设计及PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.1.2.5 克隆载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.1.2.6 构建过量表达载体 | 第39-40页 |
| 3.1.2.7 构建RNAi干扰中间载体 | 第40-43页 |
| 3.1.2.7.1 引物设计 | 第40页 |
| 3.1.2.7.2 PCR扩增反应 | 第40页 |
| 3.1.2.7.3 RiOsMADs27和RiOsMADs57 PCR产物的回收 | 第40-41页 |
| 3.1.2.7.4 酶切连接 | 第41-42页 |
| 3.1.2.7.5 RNAi干扰载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.1.2.8 载体转入农杆菌 | 第43-44页 |
| 3.1.2.8.1 农杆菌EH105感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| 3.1.2.8.2 目的载体转化农杆菌EHA105 | 第44页 |
| 3.1.2.9 农杆菌介导的水稻愈伤组织转化 | 第44-46页 |
| 3.1.2.9.1 日本晴愈伤组织的准备 | 第44页 |
| 3.1.2.9.2 农杆菌的准备 | 第44-45页 |
| 3.1.2.9.3 愈伤准备及农杆菌侵染 | 第45页 |
| 3.1.2.9.4 抗性愈伤的筛选 | 第45页 |
| 3.1.2.9.5 抗性愈伤的分化培养 | 第45页 |
| 3.1.2.9.6 壮根和移苗 | 第45-46页 |
| 3.1.2.9.7 PCR检测水稻转基因植株 | 第46页 |
| 3.1.2.10 农杆菌介导的拟南芥花序侵染 | 第46-48页 |
| 3.1.2.10.1 拟南芥种子表面的消毒 | 第46-47页 |
| 3.1.2.10.2 播种在培养皿内 | 第47页 |
| 3.1.2.10.3 拟南芥的生长条件 | 第47页 |
| 3.1.2.10.4 拟南芥农杆菌花序浸染 | 第47页 |
| 3.1.2.10.5 转基因植株的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2 结果分析 | 第48-54页 |
| 3.2.1 ANR1基因序列的分析 | 第48-50页 |
| 3.2.2 ANR1水稻同源基因的克隆与表达载体构建 | 第50-54页 |
| 3.2.2.1 基因克隆与过量表达载体构建 | 第50-52页 |
| 3.2.2.2 OsMADs27和OsMADs57 RNAi干扰载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.2.2.3 农杆菌介导的水稻转化 | 第53-54页 |
| 3.2.2.4 目的载体转化拟南芥 | 第54页 |
| 3.3 讨论 | 第54-57页 |
| 3.3.1 ANR1水稻同源基因功能推测 | 第54-55页 |
| 3.3.2 基因克隆与载体构建 | 第55页 |
| 3.3.3 农杆菌介导的水稻转基因研究 | 第55-56页 |
| 3.3.4 拟南芥花序浸染法的优点 | 第56-57页 |
| 4 水稻营养实验 | 第57-73页 |
| 4.1 材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.1.1 试验材料与生化试剂 | 第57页 |
| 4.1.1.1 试验材料 | 第57页 |
| 4.1.1.2 生化试剂 | 第57页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第57-61页 |
| 4.1.2.1 检测目的基因在水稻不同组织中的表达量 | 第57-58页 |
| 4.1.2.2 N饥饿及再供应不同形态N的处理 | 第58-59页 |
| 4.1.2.3 短时间的NO_3~-诱导实验 | 第59页 |
| 4.1.2.4 P饥饿处理 | 第59-60页 |
| 4.1.2.5 S饥饿处理 | 第60页 |
| 4.1.2.6 水稻激素处理 | 第60-61页 |
| 4.2 结果分析 | 第61-71页 |
| 4.2.1 目标基因在水稻不同组织中的表达量 | 第61-62页 |
| 4.2.2 目标基因对N饥饿及供应不同形态N的响应 | 第62-64页 |
| 4.2.3 目标基因对NO_3~-短时间的响应方式 | 第64-65页 |
| 4.2.4 缺P处理对目标基因表达量的影响 | 第65-67页 |
| 4.2.5 缺S处理对目标基因表达量的影响 | 第67-68页 |
| 4.2.6 激素处理对目标基因表达量的影响 | 第68-71页 |
| 4.3 讨论 | 第71-73页 |
| 4.3.1 荧光定量引物设计 | 第71页 |
| 4.3.2 相对定量的计算方法 | 第71页 |
| 4.3.3 基因的组织表达量 | 第71页 |
| 4.3.4 目标基因不同的氮、磷、硫响应方式 | 第71-73页 |
| 5 结论与后续展望 | 第73-75页 |
| 5.1 结论 | 第73-74页 |
| 5.2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 个人简历 | 第89页 |
