| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 普鲁兰酶的概述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 工业中的淀粉质原料 | 第11-12页 |
| 1.1.2 淀粉水解酶 | 第12-13页 |
| 1.1.3 微生物脱支酶 | 第13页 |
| 1.1.4 普鲁兰酶的基本介绍 | 第13-17页 |
| 1.1.5 普鲁兰酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 普鲁兰酶的国内外研究现状 | 第18-19页 |
| 1.2.1 普鲁兰酶的主要产生菌种 | 第18页 |
| 1.2.2 基因工程技术在普鲁兰酶研究领域的应用概况 | 第18-19页 |
| 1.3 酶的计算机辅助设计改造 | 第19-22页 |
| 1.3.1 合成生物学 | 第19-20页 |
| 1.3.2 酶蛋白的计算机辅助设计 | 第20-21页 |
| 1.3.3 计算机辅助设计在酶工程中的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.5 研究内容 | 第23-24页 |
| 2 普鲁兰酶毕赤酵母基因工程菌的构建及筛选 | 第24-34页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 材料和仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-33页 |
| 2.3.1 普鲁兰酶氨基酸序列的分析 | 第28-29页 |
| 2.3.2 普鲁兰酶基因序列的密码子优化 | 第29页 |
| 2.3.3 普鲁兰酶基因序列的拼接与合成 | 第29-31页 |
| 2.3.4 普鲁兰酶表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.3.5 普鲁兰酶毕赤酵母基因工程菌的构建和筛选 | 第31-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 3 重组普鲁兰酶的分离纯化与酶学性质分析 | 第34-41页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 材料与方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 材料和仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 3.3.1 重组酶的纯化和SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 3.3.2 温度对重组酶的影响 | 第37页 |
| 3.3.3 pH对重组酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.4 金属离子和化学试剂对重组酶的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.5 重组酶的底物特异性和动力学参数 | 第39-40页 |
| 3.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 4 普鲁兰酶产生菌的定点突变 | 第41-57页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 材料与方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 材料和仪器 | 第41页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第43-56页 |
| 4.3.1 突变位点的分析和确定 | 第43-53页 |
| 4.3.2 突变基因的合成 | 第53-56页 |
| 4.3.3 突变体基因的表达 | 第56页 |
| 4.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 5 定点突变改造的普鲁兰酶酶学性质研究 | 第57-64页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 材料与方法 | 第57-58页 |
| 5.2.1 材料和仪器 | 第57页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第57-58页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| 5.3.1 重组突变酶的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第58-59页 |
| 5.3.2 重组突变酶的比活力和动力学参数分析 | 第59-60页 |
| 5.3.3 温度对重组突变酶的影响 | 第60-61页 |
| 5.3.4 pH对重组突变酶的影响 | 第61-63页 |
| 5.3.5 金属离子对突变酶的影响 | 第63页 |
| 5.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 6 总结与展望 | 第64-66页 |
| 6.1 本研究的主要结论 | 第64页 |
| 6.2 本研究的主要创新点 | 第64-65页 |
| 6.3 有待进一步研究的问题 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 主要研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |