| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语及专有词汇检索表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-39页 |
| 1 木质纤维素和木聚糖 | 第16-18页 |
| 1.1 木质纤维素的组成及结构 | 第16页 |
| 1.2 木聚糖 | 第16-18页 |
| 2 木聚糖酶 | 第18-25页 |
| 2.1 木聚糖酶及其分类 | 第18-23页 |
| 2.2 木聚糖酶结构 | 第23-25页 |
| 3 产木聚糖酶微生物 | 第25-29页 |
| 4. 木聚糖酶真菌表达系统研究进展 | 第29-31页 |
| 4.1 酵母表达系统 | 第29-30页 |
| 4.2 丝状真菌表达系统 | 第30-31页 |
| 5 内切木聚糖酶与酯酶协同作用研究进展 | 第31-37页 |
| 5.1 半纤维素酶之间的协同研究 | 第31-34页 |
| 5.2 CBM在半纤维素酶协同研究中的应用 | 第34-35页 |
| 5.3 木质纤维素预处理 | 第35-37页 |
| 6 研究内容及技术路线 | 第37-39页 |
| 第二章 构建烟曲霉Z5木聚糖酶基因黑曲霉异源表达系统的条件探索 | 第39-61页 |
| 1. 技术路线 | 第39-40页 |
| 2. 试验材料 | 第40-42页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第40-41页 |
| 2.2 培养基 | 第41页 |
| 2.3 试剂盒 | 第41页 |
| 2.4 化学试剂 | 第41-42页 |
| 2.5 引物设计 | 第42页 |
| 3. 试验方法 | 第42-49页 |
| 3.1 木聚糖酶序列分析 | 第42-43页 |
| 3.2 表达载体构建 | 第43-46页 |
| 3.3 黑曲霉原生质体制备 | 第46页 |
| 3.4 黑曲霉原生质体共转化 | 第46-47页 |
| 3.5 黑曲霉转化子验证 | 第47-48页 |
| 3.6 产酶发酵 | 第48页 |
| 3.7 酶活测定 | 第48-49页 |
| 3.8 SDS-PAGE分析 | 第49页 |
| 4. 结果与分析 | 第49-59页 |
| 4.1 木聚糖酶序列分析 | 第49-52页 |
| 4.2 表达载体构建 | 第52-54页 |
| 4.3 黑曲霉原生质体制备 | 第54-55页 |
| 4.4 原生质共转化 | 第55-56页 |
| 4.5 黑曲霉转化子验证 | 第56-58页 |
| 4.6 转化子发酵液酶活测定及SDS-PAGE分析 | 第58-59页 |
| 5. 讨论 | 第59-60页 |
| 6. 本章小结 | 第60-61页 |
| 第三章 A.fumigatus Z5内切木聚糖酶基因Y699-09486在毕赤酵母中的异源表达 | 第61-81页 |
| 1. 技术路线 | 第61-62页 |
| 2. 试验材料 | 第62页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第62页 |
| 2.2 培养基 | 第62页 |
| 2.3 化学试剂 | 第62页 |
| 3. 试验方法 | 第62-67页 |
| 3.1 表达载体构建 | 第62页 |
| 3.2 毕赤酵母X33感受态制备 | 第62-63页 |
| 3.3 毕赤酵母X33电转化 | 第63页 |
| 3.4 多拷贝转化子的筛选及菌落PCR验证 | 第63-64页 |
| 3.5 转化子产酶诱导发酵 | 第64页 |
| 3.6 产酶发酵液SDS-PAGE分析及酶活测定 | 第64-65页 |
| 3.7 酶的浓缩与纯化 | 第65页 |
| 3.9 酶学性质分析 | 第65-66页 |
| 3.10 酶动力学测定 | 第66页 |
| 3.11 β-1,4-内切木聚糖酶Xyn10B,Xyn10C对玉米芯的水解 | 第66-67页 |
| 4. 结果与分析 | 第67-79页 |
| 4.1 表达载体构建 | 第67-68页 |
| 4.2 毕赤酵母X33电转化 | 第68-69页 |
| 4.3 产酶发酵液的SDS-PAGE分析及酶活测定 | 第69页 |
| 4.4 酶的浓缩与纯化 | 第69-71页 |
| 4.5 酶学性质分析 | 第71-76页 |
| 4.6 酶动力学测定 | 第76-77页 |
| 4.7 β-1,4-内切木聚糖酶Xyn10B,Xyn10C对玉米芯的水解 | 第77-79页 |
| 5. 讨论 | 第79-80页 |
| 6. 本章小结 | 第80-81页 |
| 第四章 内切木聚糖酶Xyn10B和CBM_1在毕赤酵母中的融合表达 | 第81-101页 |
| 1. 表达策略 | 第81页 |
| 2. 试验材料 | 第81-82页 |
| 3. 试验方法 | 第82-85页 |
| 3.1 融合PCR | 第82-83页 |
| 3.2 表达载体pPICZαA-6333cbm的构建 | 第83页 |
| 3.3 6333cbm在毕赤酵母X33内的异源表达 | 第83-84页 |
| 3.4 异源表达的融合蛋白的酶活测定及纯化 | 第84页 |
| 3.5 异源表达的融合蛋白的酶学性质测定 | 第84页 |
| 3.6 异源表达的融合蛋白酶动力学测定 | 第84页 |
| 3.7 异源表达的融合蛋白CBM功能测定 | 第84页 |
| 3.8 内切木聚糖酶Xyn10B,Xyn10C以及融合蛋白对玉米芯的水解 | 第84-85页 |
| 4. 结果与分析 | 第85-98页 |
| 4.1 木聚糖酶基因Y699-06333序列分析 | 第85页 |
| 4.2 待融合片段6333和cbm的单独扩增 | 第85-86页 |
| 4.3 融合per | 第86-87页 |
| 4.4 表达载体的构建及其在毕赤酵母X33内的异源表达 | 第87-88页 |
| 4.5 Xyn10B和Xyn10BaLC的酶学性质分析 | 第88-93页 |
| 4.6 Xyn10B和Xyn10BaLC的酶动力学参数测定 | 第93-94页 |
| 4.7 Xyn10B和Xyn10BaLC的CBM功能测定 | 第94-95页 |
| 4.8 β-1,4-内切木聚糖酶Xyn10B,Xyn10BaLC,Xyn10C对玉米芯的水解 | 第95-98页 |
| 5. 讨论 | 第98-99页 |
| 6. 本章小结 | 第99-101页 |
| 第五章 乙酰木聚糖酯酶基因Y699-05457在毕赤酵母中的异源表达及其与内切木聚糖酶间的协同作用研究 | 第101-123页 |
| 1. 表达策略 | 第101页 |
| 2. 试验材料 | 第101-102页 |
| 3. 试验方法 | 第102-104页 |
| 3.1 乙酰木聚糖酯酶基因在毕赤酵母X33内的异源表达 | 第102页 |
| 3.2 乙酰木聚糖酯酶AXE1的酶学性质测定 | 第102-103页 |
| 3.3 乙酰木聚糖酯酶AXE1的酶动力学参数测定 | 第103页 |
| 3.4 乙酰木聚糖酯酶AXE1水解WCCP过程中溶液的pH值变化 | 第103-104页 |
| 3.5 乙酰木聚糖酯酶AXE1的CBM功能测定 | 第104页 |
| 3.6 乙酰木聚糖酯酶与内切木聚糖酶Xyn10B,Xyn10BaLC,Xyn10C的协同作用 | 第104页 |
| 3.7 不同处理的玉米芯对乙酰木聚糖酯酶与内切木木聚糖酶间协同作用的影响 | 第104页 |
| 4. 结果与分析 | 第104-121页 |
| 4.1 表达载体pPICZαA-5457的构建 | 第104-105页 |
| 4.2 Y699-05457在毕赤酵母X33内的异源表达 | 第105-106页 |
| 4.3 乙酰木聚糖酯酶AXE1的酶学性质测定 | 第106-110页 |
| 4.4 乙酰木聚糖酯酶AXE1的酶动力学参数测定 | 第110-111页 |
| 4.5 乙酰木聚糖酯酶AXE1水解WCCP过程中溶液的pH值变化 | 第111页 |
| 4.6 乙酰木聚糖酯酶AXE1的CBM功能测定 | 第111-112页 |
| 4.7 乙酰木聚糖酯酶AXE1与内切木聚糖酶Xyn10B,Xyn10BaLC,Xyn10C的协同作用 | 第112-116页 |
| 4.8 不同处理的玉米芯对乙酰木聚糖酯酶与内切木木聚糖酶间协同作用的影响 | 第116-121页 |
| 5. 讨论 | 第121-122页 |
| 6. 本章小结 | 第122-123页 |
| 全文结论 | 第123-125页 |
| 创新点 | 第125-126页 |
| 展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-141页 |
| 硕士期间发表及待发表的学术论文 | 第141-143页 |
| 致谢 | 第143页 |
