| 缩略词表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-20页 |
| 材料和方法 | 第20-61页 |
| 1 材料 | 第20-24页 |
| 1.1 菌株与细胞株 | 第20页 |
| 1.2 实验用质粒 | 第20页 |
| 1.3 实验所用的试剂盒 | 第20-21页 |
| 1.4 细胞培养试剂 | 第21页 |
| 1.5 分子生物学试剂与其它化学试剂 | 第21-22页 |
| 1.6 抗体 | 第22-23页 |
| 1.7 实验所用的主要器材与设备仪器 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-57页 |
| 2.1 Southern Blotting测定端粒长度 | 第24-27页 |
| 2.2 TRAP测定端粒酶活性（选用Millipore试剂盒） | 第27-30页 |
| 2.3 Flag-h TERT蛋白的体外翻译 | 第30页 |
| 2.4 hTR及其突变体的体外转录 | 第30-32页 |
| 2.5 端粒酶活性体外重构实验 | 第32页 |
| 2.6 细胞培养 | 第32-34页 |
| 2.7 原代MEF细胞的分离 | 第34-35页 |
| 2.8 细胞转染与病毒的包装、感染 | 第35-38页 |
| 2.9 细胞生长曲线测定 | 第38-39页 |
| 2.10 Brd U掺入实验 | 第39页 |
| 2.11 分子克隆 | 第39-45页 |
| 2.12 GAB稳定细胞系构建 | 第45页 |
| 2.13 蛋白印记 | 第45-48页 |
| 2.14 Co-IP | 第48-49页 |
| 2.15 GST Pull-Down | 第49-51页 |
| 2.16 蛋白与RNA体外结合实验 | 第51页 |
| 2.17 RIP | 第51-52页 |
| 2.18 ChIP | 第52-53页 |
| 2.19 IF | 第53-54页 |
| 2.20 SA-β-Gal染色 | 第54页 |
| 2.21 转基因小鼠鉴定 | 第54-55页 |
| 2.22 免疫组化 | 第55-56页 |
| 2.23 RNA-EMSA | 第56-57页 |
| 3 在读期间构建的质粒克隆 | 第57-61页 |
| 结果 | 第61-114页 |
| 第一部分 GAB在肿瘤与衰老中的功能研究 | 第61-71页 |
| 1 GAB与细胞生长的关系 | 第61-63页 |
| 1.1 GAB促进端粒酶阳性肿瘤细胞生长 | 第61-62页 |
| 1.2 GAB与hTERT均不调控端粒酶阴性肿瘤细胞的生长 | 第62页 |
| 1.3 敲低GAB将MCF-7 细胞周期阻滞于G1/S期 | 第62-63页 |
| 2 GAB与DNA损伤 | 第63-65页 |
| 2.1 长期敲低GAB引起ATM 1981位与H2AX磷酸化 | 第63-64页 |
| 2.2 长期稳定敲低GAB引起 53BP1在DNA损伤处聚集,并引起Chk1345位与Chk268位氨基酸磷酸化 | 第64-65页 |
| 3 GAB与细胞衰老 | 第65-71页 |
| 3.1 长期敲低GAB引起MCF-7 细胞发生衰老 | 第65-67页 |
| 3.2 长期敲低GAB可以诱导衰老相关异染色质的形成 | 第67-68页 |
| 3.3 长期敲低GAB所引发的衰老细胞与DNA损伤的细胞相同 | 第68页 |
| 3.4 GAB调控细胞复制性衰老 | 第68-69页 |
| 3.5 GAB不定位到端粒 | 第69页 |
| 3.6 敲低GAB后，hTERT定位到端粒的数量减少 | 第69-71页 |
| 第二部分 GAB调节细胞复制性衰老的机制 | 第71-108页 |
| 1 GAB与hTERT的相互作用及定位 | 第71-75页 |
| 1.1 GAB与hTERT发生相互作用 | 第71页 |
| 1.2 GAB、hTERT及其相关突变体蛋白的纯化 | 第71-72页 |
| 1.3 GAB与hTERT体外直接相互作用及定位 | 第72-74页 |
| 1.4 GAB与TERT的相互作用不是由RNA介导的 | 第74-75页 |
| 2 GAB与Dyskerin的相互作用 | 第75-76页 |
| 2.1 GAB与Dyskerin存在相互作用且此相互作用为RNA介导 | 第75-76页 |
| 2.2 GAB与Dyskerin在体外并非直接结合而是需要hTR介导 | 第76页 |
| 3 GAB与hTR的相互作用及其定位 | 第76-84页 |
| 3.1 GAB与hTR相互作用的在线预测 | 第76-78页 |
| 3.2 GAB与hTR存在相互作用 | 第78-79页 |
| 3.3 GAB与hTR相互作用的定位 | 第79页 |
| 3.4 GAB与hTR在体外存在直接相互作用 | 第79-80页 |
| 3.5 GAB与hTR在体外直接相互作用的定位 | 第80-82页 |
| 3.6 RNA-EMSA进一步确认GAB与hTR在体外直接相互作用定位 | 第82-84页 |
| 4 GAB调节端粒酶活性 | 第84-96页 |
| 4.1 MCF-7、MEF、HT1080端粒酶活性的比较 | 第84-85页 |
| 4.2 敲低GAB降低HT1080细胞的端粒酶活性 | 第85页 |
| 4.3 GAB调控端粒酶活性的主要结构域 | 第85-92页 |
| 4.4 GAB-IP复合体具有较高的端粒酶活性 | 第92页 |
| 4.5 GAB的含量对端粒酶活性的影响 | 第92-93页 |
| 4.6 GAB调控端粒酶活性不依赖于Pinx1 | 第93-94页 |
| 4.7 动物实验证明GAB调控端粒酶活性 | 第94-96页 |
| 5 GAB调节端粒酶活性的具体分子机制 | 第96-107页 |
| 5.1 GAB不改变hTR的表达水平 | 第96-97页 |
| 5.2 GAB不改变Dyskerin与hTERT的表达水平 | 第97-98页 |
| 5.3 GAB调节hTERT与hTR结合及调节二者结合的主要结构域 | 第98-100页 |
| 5.4 GAB对hTERT与Dyskerin、hTERT与TCAB1结合的影响 | 第100-101页 |
| 5.5 敲低GAB抑制Dyskerin与hTR的结合 | 第101-102页 |
| 5.6 GAB、TCAB1与hTERT细胞内定位的研究 | 第102-105页 |
| 5.7 GAB调控端粒酶与Pontin、Reptin无关 | 第105-107页 |
| 6 组织中端粒酶活性与GAB表达的初步探索 | 第107-108页 |
| 第三部分 p53在GAB调控端粒酶过程中的初步探索 | 第108-114页 |
| 1 p53、GAB与端粒酶活性 | 第108-111页 |
| 1.1 p53促进ZR75-1 细胞的端粒酶活性 | 第108页 |
| 1.2 GAB调节端粒酶活性部分依赖于p53而发挥作用 | 第108-110页 |
| 1.3 HCT116细胞中GAB调节端粒酶活性依赖于p53 | 第110-111页 |
| 2 GAB与p53存在直接相互作用 | 第111-112页 |
| 2.1 GAB与p53存在相互作用 | 第111页 |
| 2.2 GAB与p53存在直接相互作用 | 第111-112页 |
| 3 敲低GAB在HCT116 p53~(+/+)细胞中抑制hTERT与hTR的结合 | 第112-114页 |
| 讨论 | 第114-117页 |
| 结论 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-122页 |
| 个人简历 | 第122-123页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章情况 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
