摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7页 |
英文缩略表 | 第11-12页 |
第一章 引言 | 第12-19页 |
1.1 病原学特征 | 第12-13页 |
1.2 主要蛋白 | 第13-14页 |
1.2.1 结构蛋白 | 第13-14页 |
1.2.2 非结构蛋白 | 第14页 |
1.3 流行病学 | 第14-15页 |
1.4 致病机理 | 第15页 |
1.5 临床症状及病理变化 | 第15页 |
1.6 诊断 | 第15-17页 |
1.6.1 病原学诊断 | 第16页 |
1.6.2 血清学诊断 | 第16-17页 |
1.6.3 分子生物学诊断 | 第17页 |
1.7 预防和控制 | 第17页 |
1.8 目的和意义 | 第17-19页 |
第二章 水貂阿留申病毒分离株序列分析 | 第19-28页 |
2.1 材料 | 第19页 |
2.1.1 克隆载体、菌株和毒株 | 第19页 |
2.1.2 酶和试剂 | 第19页 |
2.2 方法 | 第19-22页 |
2.2.1 病毒DNA的提取 | 第19页 |
2.2.2 引物设计 | 第19-20页 |
2.2.3 病毒PCR鉴定 | 第20页 |
2.2.4 病毒基因克隆与拼接 | 第20-21页 |
2.2.5 序列分析和进化树构建 | 第21-22页 |
2.3 结果 | 第22-26页 |
2.3.1 病毒的PCR鉴定结果 | 第22-23页 |
2.3.2 编码区基因序列分析 | 第23-24页 |
2.3.3 结构蛋白VP2生物信息学分析 | 第24-26页 |
2.4 讨论 | 第26-28页 |
第三章 水貂阿留申病毒VP2332-452蛋白的原核表达与纯化 | 第28-36页 |
3.1 材料 | 第28页 |
3.1.1 毒株 | 第28页 |
3.1.2 载体和菌株 | 第28页 |
3.1.3 主要试剂 | 第28页 |
3.1.4 主要仪器 | 第28页 |
3.2 方法 | 第28-31页 |
3.2.1 引物设计 | 第28-29页 |
3.2.2 目的基因的扩增与纯化 | 第29页 |
3.2.3 目的基因与pMAL-c2x载体的双酶切 | 第29页 |
3.2.4 目的基因与pMAL-c2x载体连接 | 第29-30页 |
3.2.5 连接产物的转化与摇菌 | 第30页 |
3.2.6 重组质粒的提取与鉴定 | 第30页 |
3.2.7 融合蛋白的原核表达 | 第30-31页 |
3.2.8 蛋白质免疫印迹(Western blotting)鉴定融合蛋白 | 第31页 |
3.2.9 融合蛋白的纯化 | 第31页 |
3.3 结果 | 第31-34页 |
3.3.1 水貂阿留申病毒VP2994-1356基因的扩增结果 | 第31-32页 |
3.3.2 重组质粒的构建和鉴定结果 | 第32页 |
3.3.3 融合蛋白的表达结果 | 第32-33页 |
3.3.4 Western blotting鉴定结果 | 第33-34页 |
3.3.5 融合蛋白的纯化结果 | 第34页 |
3.4 讨论 | 第34-36页 |
第四章 ELISA检测方法的建立及应用 | 第36-45页 |
4.1 材料 | 第36页 |
4.1.1 主要试剂 | 第36页 |
4.1.2 主要仪器 | 第36页 |
4.1.3 待检血清 | 第36页 |
4.2 方法 | 第36-39页 |
4.2.1 水貂阿留申病毒抗体ELISA检测方法的操作步骤 | 第36页 |
4.2.2 ELISA检测条件的优化 | 第36-37页 |
4.2.3 阴阳性临界值的确定 | 第37页 |
4.2.4 特异性试验 | 第37页 |
4.2.5 敏感性试验 | 第37-38页 |
4.2.6 重复性试验 | 第38页 |
4.2.7 比对试验 | 第38-39页 |
4.2.8 临床样品的检测 | 第39页 |
4.3 结果 | 第39-43页 |
4.3.1 ELISA检测条件优化 | 第39-41页 |
4.3.2 阴阳性临界值 | 第41页 |
4.3.3 特异性试验结果 | 第41-42页 |
4.3.4 敏感性试验结果 | 第42页 |
4.3.5 重复性试验结果 | 第42页 |
4.3.6 比对试验结果 | 第42-43页 |
4.3.7 临床样品检测结果 | 第43页 |
4.4 讨论 | 第43-45页 |
第五章 全文结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-51页 |
附录 | 第51-58页 |
致谢 | 第58-59页 |
作者简历 | 第59页 |