| 中文摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 材料和方法 | 第13-22页 |
| 1. 实验材料 | 第13-14页 |
| 1.1 质粒和细胞 | 第13页 |
| 1.2 主要试剂 | 第13-14页 |
| 1.3 主要仪器 | 第14页 |
| 2. 试验方法 | 第14-22页 |
| 2.1 Real-time PCR检测人前列腺正常上皮细胞RWPE-1和人前列腺癌细胞Lncap、DU145及PC3细胞中miR-363-3p的表达水平 | 第14-15页 |
| 2.1.1 细胞培养和MicroRNA逆转录 | 第14-15页 |
| 2.1.2 MicroRNA real-time PCR反应 | 第15页 |
| 2.2 重组慢病毒miR-363-3p和miR-363-3p sponge质粒的构建和鉴定 | 第15-19页 |
| 2.2.1 miR-363-3p片段的PCR扩增 | 第16页 |
| 2.2.2 目的基因的获取 | 第16页 |
| 2.2.3 miR-363-3p序列与载体的酶切、连接和转化 | 第16-17页 |
| 2.2.4 重组慢病毒miR-363-3p sponge质粒的构建和鉴定 | 第17-19页 |
| 2.3 miR-363-3p慢病毒的包装及滴度测定 | 第19页 |
| 2.4 稳定表达细胞系的建立与鉴定 | 第19-20页 |
| 2.4.1 稳定表达细胞系的建立 | 第19-20页 |
| 2.4.2 qRT-PCR检测miR-363-3p的水平 | 第20页 |
| 2.5 平板克隆实验检测细胞克隆增殖 | 第20页 |
| 2.6 CCK8实验检测细胞增殖 | 第20页 |
| 2.7 检测细胞迁移侵袭能力 | 第20-21页 |
| 2.7.1 Transwell实验检测细胞迁移能力 | 第21页 |
| 2.7.2 Transwell实验检测细胞侵袭能力 | 第21页 |
| 2.8 微管形成实验检测miR-363-3p在体外对血管形成能力的影响 | 第21-22页 |
| 3 统计学处理 | 第22页 |
| 结果 | 第22-29页 |
| 1. 人前列腺正常上皮细胞RWPE-1和人前列腺癌细Lncap、DU145及PC3细胞中miR-363-3p的表达水平 | 第22-23页 |
| 2. 慢病毒的包装及病毒滴度的测定 | 第23页 |
| 3. 稳定表达细胞系的验证 | 第23-24页 |
| 4. 平板克隆和CCK8试验检测细胞增殖能力 | 第24-25页 |
| 4.1 平板克隆试验检测miR-363-3p对DU145和PC3细胞增殖能力的影响 | 第24-25页 |
| 4.2 CCK8试验检测miR-363-3p对DU145和PC3细胞增殖能力的影响 | 第25页 |
| 5. miR-363-3p对DU145和PC3细胞体外迁移侵袭能力的影响 | 第25-27页 |
| 5.1 miR-363-3p对DU145和PC3细胞体外迁移能力的影响 | 第25-26页 |
| 5.2 miR-363-3p对DU145和PC3细胞体外侵袭能力的影响 | 第26-27页 |
| 6. miR-363-3p对细胞体外微管形成能力的影响 | 第27-29页 |
| 讨论 | 第29-32页 |
| 全文总结 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 综述 | 第36-50页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录1 试剂 | 第50-51页 |
| 附录2 实验方法 | 第51-53页 |
| 附录3 常用缩略词中英文对照 | 第53-55页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
