抗卵清蛋白单克隆抗体的制备及卵清蛋白、醇溶蛋白ELISA检测方法的建立
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| ·食品过敏症及其发病机制 | 第16-18页 |
| ·食品过敏症及危害 | 第16-17页 |
| ·食品过敏的发病机制 | 第17-18页 |
| ·食品过敏原的研究现状与进展 | 第18页 |
| ·食品过敏原的检测方法 | 第18-23页 |
| ·体内检测 | 第18-19页 |
| ·双盲对照食品激发实验 | 第19页 |
| ·皮肤试验 | 第19页 |
| ·体外检测 | 第19-22页 |
| ·酶联免疫吸附实验 | 第19-20页 |
| ·放射过敏原吸附试验 | 第20页 |
| ·组胺释放实验 | 第20-21页 |
| ·食品过敏原指纹图谱快速检测法 | 第21页 |
| ·蛋白质检测芯片法 | 第21页 |
| ·PCR方法 | 第21-22页 |
| ·生物共振技术检测法 | 第22页 |
| ·国内外研究概况及国内存在的问题 | 第22-23页 |
| ·研究目的及意义 | 第23-26页 |
| 第二章 卵清蛋白单克隆抗体的制备 | 第26-47页 |
| ·试验材料 | 第26-29页 |
| ·试验动物和细胞 | 第26页 |
| ·主要实验试剂 | 第26-27页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第27页 |
| ·主要试剂配制 | 第27-29页 |
| ·常规试剂配制 | 第27-28页 |
| ·细胞融合试剂配制 | 第28页 |
| ·ELISA试剂配制 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE试剂配制 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-36页 |
| ·动物免疫 | 第29-30页 |
| ·小鼠血清效价的测定 | 第30-31页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第31-35页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞悬液的制备 | 第31页 |
| ·免疫脾细胞悬液的制备 | 第31-32页 |
| ·细胞融合 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第32-33页 |
| ·腹水法大量制备单克隆抗体 | 第33-34页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第35-36页 |
| ·单抗效价测定和腹水中的蛋白质含量测定 | 第35页 |
| ·单抗类型和亚类的测定 | 第35-36页 |
| ·腹水抗体的纯度分析 | 第36页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第36页 |
| ·单抗的稳定性分析 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-43页 |
| ·免疫小鼠血清效价的测定 | 第36-37页 |
| ·细胞融合和筛选结果 | 第37-38页 |
| ·克隆化结果 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体效价 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第40-41页 |
| ·腹水中蛋白质含量及抗体效价 | 第41-42页 |
| ·腹水抗体纯度分析 | 第42-43页 |
| ·单抗特异性的鉴定 | 第43页 |
| ·单抗稳定性分析 | 第43页 |
| ·讨论与小结 | 第43-47页 |
| ·关于动物免疫 | 第44页 |
| ·关于细胞融合 | 第44-45页 |
| ·关于克隆和筛选 | 第45页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第三章 卵清蛋白ELISA检测方法的建立 | 第47-67页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·主要实验试剂 | 第47-48页 |
| ·主要实验器材 | 第48页 |
| ·实验试剂的配制 | 第48-50页 |
| ·标记抗体试剂配制 | 第48页 |
| ·ELISA试剂配制 | 第48-50页 |
| ·实验方法 | 第50-54页 |
| ·HRP标记抗体的制备 | 第50-51页 |
| ·简易过碘酸钠法 | 第50页 |
| ·HRP标记抗体的工作浓度 | 第50-51页 |
| ·常规双抗体夹心ELISA法的基本程序 | 第51-52页 |
| ·包被抗体和酶标抗体的最适浓度的确定 | 第52页 |
| ·双抗体夹心ELISA条件的优化 | 第52-53页 |
| ·抗体包被条件的选择 | 第52页 |
| ·封闭条件的优化 | 第52-53页 |
| ·酶标抗体与待测抗原反应时间的优化 | 第53页 |
| ·抗原与包被抗体反应条件的优化 | 第53页 |
| ·底物作用时间的优化 | 第53页 |
| ·卵清蛋白标准曲线的建立和最低检测限的确定 | 第53页 |
| ·精密度、准确度和重复性验证 | 第53页 |
| ·特异性验证 | 第53-54页 |
| ·稳定性验证 | 第54页 |
| ·试剂盒比较 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-63页 |
| ·HRP标记抗体检测 | 第54-55页 |
| ·IgG量的测定 | 第54-55页 |
| ·HRP标记抗体的工作浓度 | 第55页 |
| ·包被抗体和酶标抗体的最适浓度 | 第55-56页 |
| ·双抗体夹心ELISA条件的确定 | 第56-59页 |
| ·抗体包被条件的确定 | 第56-57页 |
| ·封闭条件的确定 | 第57-58页 |
| ·酶标抗体与待测抗原的最佳反应时间 | 第58页 |
| ·抗原与包被抗体的最佳反应条件 | 第58-59页 |
| ·底物的最佳反应时间 | 第59页 |
| ·优化的双抗体夹心ELISA基本程序 | 第59-60页 |
| ·卵清蛋白定量的标准曲线和最低检测限 | 第60页 |
| ·精密度、准确度和重复性验证 | 第60-61页 |
| ·抗体夹心ELISA法的特异性 | 第61页 |
| ·稳定性验证 | 第61页 |
| ·与成品试剂盒比较结果 | 第61-63页 |
| ·讨论与小结 | 第63-67页 |
| ·关于免疫球蛋白标记技术 | 第63-64页 |
| ·关于ELISA检测 | 第64页 |
| ·关于ELISA封闭液的选择 | 第64页 |
| ·ELISA反应条件的优化 | 第64-65页 |
| ·标准曲线的拟合 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第四章 麦醇溶蛋白ELISA检测方法的建立 | 第67-80页 |
| ·实验材料 | 第67-70页 |
| ·主要实验动物 | 第67页 |
| ·主要实验试剂 | 第67-68页 |
| ·主要实验器材 | 第68页 |
| ·主要实验试剂配制 | 第68-70页 |
| ·ELISA试剂配制 | 第68-69页 |
| ·各种封闭液配制 | 第69页 |
| ·样品前处理 | 第69-70页 |
| ·实验方法 | 第70-72页 |
| ·免疫动物 | 第70页 |
| ·酶标抗体浓度的初步确定 | 第70页 |
| ·包被抗体浓度的初步确定 | 第70页 |
| ·包被抗体和酶标抗体的最适浓度的确定 | 第70页 |
| ·封闭液的选择 | 第70-71页 |
| ·双抗体夹心ELISA法的基本程序 | 第71页 |
| ·方法验证 | 第71-72页 |
| ·醇溶蛋白定量标准曲线的建立 | 第71页 |
| ·最低检测限的确定 | 第71页 |
| ·精密度、准确度和重复性验证 | 第71-72页 |
| ·特异性验证 | 第72页 |
| ·稳定性验证 | 第72页 |
| ·实际样品检测 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-77页 |
| ·免疫小鼠血清效价 | 第72页 |
| ·酶标抗体浓度的初步确定 | 第72页 |
| ·包被抗体浓度的初步确定 | 第72-73页 |
| ·包被抗体和酶标抗体的最适浓度 | 第73-74页 |
| ·封闭液选择 | 第74页 |
| ·醇溶蛋白标准曲线的建立 | 第74-75页 |
| ·精密度、准确度和重复性验证 | 第75页 |
| ·特异性验证 | 第75-76页 |
| ·稳定性验证 | 第76页 |
| ·试剂盒应用 | 第76-77页 |
| ·讨论与小结 | 第77-80页 |
| ·关于ELISA封闭液的选择 | 第77页 |
| ·标准曲线的拟合 | 第77-78页 |
| ·ELISA试验的影响因素 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 缩略词 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
| 发表的学术论文 | 第87页 |
