| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 黄病毒属 | 第11页 |
| 2 鸭坦布苏病毒 | 第11-12页 |
| 3 DTMUV的病原学特性 | 第12-16页 |
| 3.1 DTMUV的理化性质与培养特性 | 第13页 |
| 3.2 DTMUV的基因组及其编码蛋白 | 第13-15页 |
| 3.3 DTMUV的遗传进化研究进展 | 第15-16页 |
| 4 DTMUV感染的病理组织学变化及其在体内的分布 | 第16页 |
| 5 DTMUV的流行病学 | 第16-17页 |
| 6 DTMUV的检测 | 第17-18页 |
| 7 鸭坦布苏病毒病的防治 | 第18-19页 |
| 8 本试验的研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 DTMUV RT-PCR检测方法的建立 | 第20-30页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| 1.1 血清、毒株 | 第20页 |
| 1.2 主要试验试剂 | 第20页 |
| 1.3 主要试验仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2 试验方法 | 第21-24页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第21页 |
| 2.2 病毒核酸的提取 | 第21-22页 |
| 2.3 RT-PCR退火温度的优化 | 第22-23页 |
| 2.4 特异性试验 | 第23页 |
| 2.5 敏感性试验 | 第23页 |
| 2.6 重复性试验 | 第23页 |
| 2.7 用RT-PCR方法检测临床病料 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 3.1 RT-PCR退火温度的优化结果 | 第24-25页 |
| 3.2 特异性试验 | 第25-26页 |
| 3.3 敏感性试验 | 第26页 |
| 3.4 重复性试验 | 第26-28页 |
| 3.5 临床运用结果 | 第28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达 | 第30-46页 |
| 1 试验材料 | 第30页 |
| 1.1 血清、菌种和质粒 | 第30页 |
| 1.2 主要试验试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要试验仪器和设备 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-36页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 2.2 E基因的原核表达载体构建与鉴定 | 第31-35页 |
| 2.2.1 E基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.2 重组表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3 重组质粒的诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| 2.4 重组E蛋白的纯化与Western blot分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-43页 |
| 3.1 重组质粒pET32a(+)-E的构建结果 | 第36-40页 |
| 3.1.1 E基因PCR产物的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.2 E基因及载体pET32a(+)纯化产物的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.3 重组质粒的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.4 重组质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.5 重组质粒的测序鉴定 | 第40页 |
| 3.2 重组E蛋白的SDS-PAGE分析 | 第40-42页 |
| 3.3 重组E蛋白的纯化与Western blot分析 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录一 主要试验试剂的配制 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
