| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-34页 |
| ·孢囊线虫简介 | 第13页 |
| ·小麦禾谷孢囊线虫及其危害 | 第13-15页 |
| ·分类地位和形态特征 | 第14-15页 |
| ·小麦禾谷孢囊线虫生活史 | 第15页 |
| ·小麦禾谷孢囊线虫孵化特性 | 第15页 |
| ·传播途径 | 第15页 |
| ·植物寄生线虫效应子在线虫寄生过程中的重要作用 | 第15-20页 |
| ·参与到植物组织侵入和在组织内迁移过程 | 第17-20页 |
| ·抑制寄主反应的效应子 | 第20页 |
| ·诱导取食位点形成的效应子 | 第20页 |
| ·β-1,4-内切葡聚糖酶基因研究进展 | 第20-21页 |
| ·细胞壁扩展蛋白 expansin 研究进展 | 第21-22页 |
| ·植物对线虫的抗性 | 第22-26页 |
| ·自然抗性基因介导的抗性 | 第22-24页 |
| ·外源活性蛋白介导的抗线虫基因工程 | 第24-25页 |
| ·植物抗线虫的相关酶类 | 第25-26页 |
| ·植物寄生线虫 RNAi 研究进展 | 第26-33页 |
| ·RNAi 作用机制 | 第26-27页 |
| ·活体外 RNAi 介导的植物线虫基因功能研究 | 第27-32页 |
| ·活体内 RNAi 介导的植物线虫基因功能研究 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| ·目的 | 第33页 |
| ·意义 | 第33-34页 |
| 第二章 小麦禾谷孢囊线虫内切葡聚糖酶 ENG 基因全长克隆 | 第34-61页 |
| ·试验材料和方法 | 第34-48页 |
| ·供试线虫材料 | 第34页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·内切葡聚糖酶基因片段的获得和克隆 | 第35-37页 |
| ·RACE 获得目的基因 cDNA 5′和 3′末端 | 第37-42页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 cDNA 全长克隆 | 第42-43页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 gDNA 全长克隆 | 第43-44页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 Ha-eng-3 southern 杂交分析 | 第44-48页 |
| ·序列分析 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-59页 |
| ·内切葡聚糖酶基因片段的克隆 | 第48页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 Ha-eng-1a cDNA 全长克隆 | 第48-50页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 Ha-eng-2 cDNA 全长克隆 | 第50-51页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 Ha-eng-3 cDNA 全长克隆 | 第51-52页 |
| ·同源性搜索、多序列比对和进化树分析 | 第52-56页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 Ha-eng-1a、Ha-eng-2 和 Ha-eng-3 gDNA 全长序列 | 第56-57页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 Ha-eng-3 southern blot 分析 | 第57-59页 |
| ·小结与讨论 | 第59-61页 |
| 第三章 小麦禾谷孢囊线虫细胞壁扩展蛋白 EXP 基因全长克隆 | 第61-72页 |
| ·试验材料和方法 | 第61-66页 |
| ·供试线虫材料 | 第61页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第61页 |
| ·EXP 基因 cDNA 核心片段的扩增 | 第61-62页 |
| ·EXP 基因 cDNA 末端序列扩增 | 第62-64页 |
| ·EXP 基因 gDNA 全长序列扩增 | 第64-65页 |
| ·EXP 基因 southern 杂交分析 | 第65-66页 |
| ·序列分析 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-71页 |
| ·Ha-expb1 cDNA 核心片段的克隆 | 第66页 |
| ·Ha-expb1 基因 cDNA 末端序列的克隆 | 第66-69页 |
| ·Ha-expb1 gDNA 序列的克隆 | 第69页 |
| ·Ha-expb1 southern blot 分析 | 第69-71页 |
| ·小结与讨论 | 第71-72页 |
| 第四章 小麦禾谷孢囊线虫 ENG 和 EXP 基因表达特征分析 | 第72-87页 |
| ·实验材料和方法 | 第72-80页 |
| ·供试线虫材料 | 第72页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·原位杂交 | 第72-75页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第75-76页 |
| ·原核表达 | 第76-79页 |
| ·纤维素酶活性分析 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-86页 |
| ·ENG 和 EXP 基因组织表达定位 | 第80-82页 |
| ·ENG 和 EXP 基因发育表达类型分析 | 第82-84页 |
| ·ENG 和 EXP 基因原核诱导重组表达 | 第84-85页 |
| ·重组蛋白 HA-ENG-1A、HA-ENG-2 和 HA-ENG-3 纤维素酶活性测定 | 第85-86页 |
| ·小结与讨论 | 第86-87页 |
| 第五章 活体外 RNAi 介导的 Ha-eng-2 基因功能验证 | 第87-95页 |
| ·实验材料和方法 | 第87-91页 |
| ·供试线虫材料 | 第87页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·Ha-eng-2 dsRNA 干扰片段的合成 | 第87-89页 |
| ·浸泡刺激体系的建立 | 第89页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 Ha-eng-2 转录丰度 | 第89-90页 |
| ·接种实验 | 第90页 |
| ·小麦根组织内线虫染色 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-93页 |
| ·Ha-eng-2 dsRNA 合成效果 | 第91页 |
| ·二龄幼虫吞咽效果 | 第91-92页 |
| ·Ha-eng-2 基因转录丰度检测 | 第92-93页 |
| ·活体外介导的 Ha-eng-2 RNAi 对线虫侵染能力的影响 | 第93页 |
| ·小结与讨论 | 第93-95页 |
| 第六章 全文结论 | 第95-97页 |
| 1. 克隆了小麦禾谷孢囊线虫细胞壁降解酶基因 | 第95-96页 |
| 2. 完成了目的基因的表达定位和发育表达类型分析 | 第96页 |
| 3. 活体外 RNAi 分析了 β-1,4-内切葡聚糖酶的重要性 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 作者简介 | 第109页 |
