| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-37页 |
| 1.1 VD_3及其羟化产物概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 VD_3的生理活性及其人体内代谢循环。 | 第14-15页 |
| 1.1.2 VD_3羟化产物的体内合成机理及其生理功能 | 第15-17页 |
| 1.2 VD_3羟化合成活性VD_3的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第17页 |
| 1.2.2 微生物转化法 | 第17-20页 |
| 1.2.3 CYP107（Vdh）研究 | 第20-22页 |
| 1.3 影响VD_3羟化反应的关键因素 | 第22-29页 |
| 1.3.1 细胞膜的通透性 | 第22-25页 |
| 1.3.2 电子传递链的构建 | 第25-28页 |
| 1.3.3 辅酶循环系统 | 第28-29页 |
| 1.4 本论文的选题意义及研究内容 | 第29页 |
| 参考文献 | 第29-37页 |
| 第二章 羟化酶Vdh及电子传递链基因工程菌的构建与表达 | 第37-57页 |
| 2.1 前言 | 第37-38页 |
| 2.2 材料与方法 | 第38-47页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第38页 |
| 2.2.2 培养基 | 第38页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第38-39页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第39页 |
| 2.2.5 0.9%琼脂糖凝胶电泳制备 | 第39-40页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE蛋白电泳步骤 | 第40-41页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化 | 第41-43页 |
| 2.2.8 羟化酶的选择及其表达载体的构建 | 第43-45页 |
| 2.2.9 电子传递链的选择其表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.10 Vdh羟化酶及电子传递链FdR-Fdx诱导表达优化 | 第46-47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 2.3.1 VD_3羟化酶Vdh在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| 2.3.2 Fdr-Fdx电子传递链在大肠杆菌中的表达 | 第48-50页 |
| 2.3.3 重组菌表达的条件优化 | 第50-54页 |
| 2.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第三章 Vdh及其催化体系中电子传递链的生物学活性分析 | 第57-73页 |
| 3.1 引言 | 第57页 |
| 3.2 材料与方法 | 第57-63页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第57-58页 |
| 3.2.2 培养基及溶液配备 | 第58页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第58-59页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第59页 |
| 3.2.5 Vdh酶的纯化 | 第59-60页 |
| 3.2.6 Vdh酶的CO差光谱法 | 第60-61页 |
| 3.2.7 DCPIP测FdR的电子传递效果 | 第61-62页 |
| 3.2.8 细胞色素C测Fdx与FdR的偶联性 | 第62页 |
| 3.2.9 Vdh与FdR-Fdx的偶联 | 第62-63页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第63-70页 |
| 3.3.1 Vdh酶的纯化 | 第63-64页 |
| 3.3.2 Vdh-CO差相光谱 | 第64-65页 |
| 3.3.3 Vdh H电子传递链的活性研究 | 第65-70页 |
| 3.3.4 电子传递链FdR-Fdx与连二亚硫酸钠对Vdh酶的还原力的比较 | 第70页 |
| 3.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第四章 Vdh酶及其电子传递链在催化VD_3羟化反应过程的初步研究 | 第73-92页 |
| 4.1 引言 | 第73-74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-79页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第74页 |
| 4.2.2 培养基 | 第74页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第74页 |
| 4.2.4 主要实验仪器 | 第74-75页 |
| 4.2.5 VD_3及羟化产物检测方法的确定及标准曲线制作 | 第75-77页 |
| 4.2.6 羟化反应体系的建立及参数优化 | 第77-79页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第79-89页 |
| 4.3.1 VD_3检测条件方法的建立与标准曲线制作 | 第79-81页 |
| 4.3.2 VD_3羟化反应体系的优化 | 第81-89页 |
| 4.4 本章小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 第五章 VD_3羟化反应体系的辅酶循环体系的探索 | 第92-106页 |
| 5.1 引言 | 第92页 |
| 5.2 材料与方法 | 第92-99页 |
| 5.2.1 菌种与质粒 | 第92-93页 |
| 5.2.2 培养基 | 第93页 |
| 5.2.3 主要工具酶及实验试剂 | 第93页 |
| 5.2.4 主要实验仪器 | 第93页 |
| 5.2.5 构建Vdh与葡萄糖脱氢酶共表达质粒 | 第93-97页 |
| 5.2.6 Vdh辅酶循环双质粒构建 | 第97-98页 |
| 5.2.7 变换质粒解决Vdh的包涵体 | 第98页 |
| 5.2.8 不同体系对羟化酶反应的比较 | 第98-99页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第99-104页 |
| 5.3.1 共表达质粒的构建 | 第99-101页 |
| 5.3.2 双质粒辅酶循环体系的建立 | 第101页 |
| 5.3.3 变换质粒解决包涵体问题 | 第101-102页 |
| 5.3.4 不同体系羟化酶的比较 | 第102-104页 |
| 5.4 本章小结 | 第104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 第六章 结论与展望 | 第106-110页 |
| 6.1 结论 | 第106-107页 |
| 6.2 展望 | 第107-110页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
