| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-34页 |
| 1.1 左乙拉西坦 | 第12-16页 |
| 1.1.1 左乙拉西坦简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 左乙拉西坦的合成 | 第13-14页 |
| 1.1.3 2-氨基丁酸的化学合成法 | 第14-15页 |
| 1.1.3.1 脱硫反应法 | 第14页 |
| 1.1.3.2 氨化水解反应法 | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 丁酮酸还原法 | 第15页 |
| 1.1.3.4 2-卤代酸的氨解法 | 第15页 |
| 1.1.4 2-氨基丁酸的生物合成方法 | 第15-16页 |
| 1.2 腈化合物与腈转化酶 | 第16-22页 |
| 1.2.1 腈水解酶 | 第17-21页 |
| 1.2.1.1 腈水解酶的来源和分类 | 第17-19页 |
| 1.2.1.2 腈水解酶的结构及作用机制 | 第19-21页 |
| 1.2.2 腈水解酶的应用 | 第21-22页 |
| 1.3 蛋白质的分子改造 | 第22-27页 |
| 1.3.1 蛋白质的理性设计 | 第22-25页 |
| 1.3.2 蛋白质的非理性设计 | 第25-27页 |
| 1.3.2.1 易错PCR | 第25-26页 |
| 1.3.2.2 DNA改组 | 第26页 |
| 1.3.2.3 高通量筛选方法 | 第26-27页 |
| 1.4 本论文研究内容 | 第27页 |
| 参考文献 | 第27-34页 |
| 第二章 腈水解酶不对称水解 2-氨基丁腈生成成L2氨基丁酸重组菌的筛选 | 第34-45页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.2.1 菌种 | 第34页 |
| 2.2.2 培养基 | 第34-35页 |
| 2.2.3 试剂 | 第35页 |
| 2.2.4 仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.5 菌体培养 | 第36页 |
| 2.2.6 薄层层析法初筛 | 第36页 |
| 2.2.7 高效液相色谱（HPLC）复筛 | 第36-37页 |
| 2.2.7.1 (S)2氨基丁酸e.e值的检测 | 第36-37页 |
| 2.2.7.2 2-氨基丁酸浓度的检测 | 第37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.3.1 薄层层析检测结果 | 第37-39页 |
| 2.3.2 2-氨基丁酸浓度检测结果 | 第39页 |
| 2.3.3 (S)2氨基丁酸e.e值检测结果 | 第39-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 第三章 腈水解酶的分子改造 | 第45-57页 |
| 3.1 引言 | 第45-46页 |
| 3.2 材料与方法 | 第46-47页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第46页 |
| 3.2.2 培养基 | 第46页 |
| 3.2.3 工具酶 | 第46页 |
| 3.2.4 试剂 | 第46页 |
| 3.2.5 仪器 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.3.1 E.coli BL21(DE3)/p ET28b-Nitbll6402重组质粒的提取 | 第47页 |
| 3.3.2 突变质粒库的建立 | 第47-50页 |
| 3.3.3 Dpn I酶切 | 第50页 |
| 3.3.4 大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态的制备 | 第50页 |
| 3.3.5 酶切产物的转化及抗性筛选 | 第50-51页 |
| 3.3.6 正向突变株筛选 | 第51页 |
| 3.3.7 正向突变腈水解酶序列测定结果 | 第51-52页 |
| 3.4 结果与分析 | 第52-54页 |
| 3.4.1 初筛方法的建立 | 第52页 |
| 3.4.2 点饱和突变的结果 | 第52-53页 |
| 3.4.3 突变重组菌培养结果 | 第53页 |
| 3.4.4 薄层层析检测结果 | 第53页 |
| 3.4.5 液相检测结果 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第四章 突变腈水解酶催化生成(S)2氨基丁酸的研究 | 第57-65页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 材料与方法 | 第57-59页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第57-58页 |
| 4.2.2 试剂 | 第58页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第58页 |
| 4.2.4 静息细胞的制备 | 第58页 |
| 4.2.5 静息细胞转化 | 第58页 |
| 4.2.6 转化温度对酶催化反应的影响 | 第58-59页 |
| 4.2.7 pH对酶催化反应的影响 | 第59页 |
| 4.2.8 菌体浓度对酶催化反应的影响 | 第59页 |
| 4.2.9 底物浓度对酶催化反应的影响 | 第59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-63页 |
| 4.3.1 转化温度对酶催化反应的影响 | 第60页 |
| 4.3.2 pH对酶催化反应的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.3 菌体浓度对酶催化反应的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.4 底物浓度对酶催化反应的影响 | 第62-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表学术论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
