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腈水解酶立体选择性催化合成(S)-2-氨基丁酸

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 绪论第12-34页
    1.1 左乙拉西坦第12-16页
        1.1.1 左乙拉西坦简介第12-13页
        1.1.2 左乙拉西坦的合成第13-14页
        1.1.3 2-氨基丁酸的化学合成法第14-15页
            1.1.3.1 脱硫反应法第14页
            1.1.3.2 氨化水解反应法第14-15页
            1.1.3.3 丁酮酸还原法第15页
            1.1.3.4 2-卤代酸的氨解法第15页
        1.1.4 2-氨基丁酸的生物合成方法第15-16页
    1.2 腈化合物与腈转化酶第16-22页
        1.2.1 腈水解酶第17-21页
            1.2.1.1 腈水解酶的来源和分类第17-19页
            1.2.1.2 腈水解酶的结构及作用机制第19-21页
        1.2.2 腈水解酶的应用第21-22页
    1.3 蛋白质的分子改造第22-27页
        1.3.1 蛋白质的理性设计第22-25页
        1.3.2 蛋白质的非理性设计第25-27页
            1.3.2.1 易错PCR第25-26页
            1.3.2.2 DNA改组第26页
            1.3.2.3 高通量筛选方法第26-27页
    1.4 本论文研究内容第27页
    参考文献第27-34页
第二章 腈水解酶不对称水解 2-氨基丁腈生成成L2氨基丁酸重组菌的筛选第34-45页
    2.1 引言第34页
    2.2 材料与方法第34-37页
        2.2.1 菌种第34页
        2.2.2 培养基第34-35页
        2.2.3 试剂第35页
        2.2.4 仪器第35-36页
        2.2.5 菌体培养第36页
        2.2.6 薄层层析法初筛第36页
        2.2.7 高效液相色谱(HPLC)复筛第36-37页
            2.2.7.1 (S)2氨基丁酸e.e值的检测第36-37页
            2.2.7.2 2-氨基丁酸浓度的检测第37页
    2.3 结果与分析第37-43页
        2.3.1 薄层层析检测结果第37-39页
        2.3.2 2-氨基丁酸浓度检测结果第39页
        2.3.3 (S)2氨基丁酸e.e值检测结果第39-43页
    2.4 本章小结第43页
    参考文献第43-45页
第三章 腈水解酶的分子改造第45-57页
    3.1 引言第45-46页
    3.2 材料与方法第46-47页
        3.2.1 菌种与质粒第46页
        3.2.2 培养基第46页
        3.2.3 工具酶第46页
        3.2.4 试剂第46页
        3.2.5 仪器第46-47页
    3.3 实验方法第47-52页
        3.3.1 E.coli BL21(DE3)/p ET28b-Nitbll6402重组质粒的提取第47页
        3.3.2 突变质粒库的建立第47-50页
        3.3.3 Dpn I酶切第50页
        3.3.4 大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态的制备第50页
        3.3.5 酶切产物的转化及抗性筛选第50-51页
        3.3.6 正向突变株筛选第51页
        3.3.7 正向突变腈水解酶序列测定结果第51-52页
    3.4 结果与分析第52-54页
        3.4.1 初筛方法的建立第52页
        3.4.2 点饱和突变的结果第52-53页
        3.4.3 突变重组菌培养结果第53页
        3.4.4 薄层层析检测结果第53页
        3.4.5 液相检测结果第53-54页
    3.5 本章小结第54-55页
    参考文献第55-57页
第四章 突变腈水解酶催化生成(S)2氨基丁酸的研究第57-65页
    4.1 引言第57页
    4.2 材料与方法第57-59页
        4.2.1 菌种与培养基第57-58页
        4.2.2 试剂第58页
        4.2.3 主要实验仪器第58页
        4.2.4 静息细胞的制备第58页
        4.2.5 静息细胞转化第58页
        4.2.6 转化温度对酶催化反应的影响第58-59页
        4.2.7 pH对酶催化反应的影响第59页
        4.2.8 菌体浓度对酶催化反应的影响第59页
        4.2.9 底物浓度对酶催化反应的影响第59页
    4.3 结果与讨论第59-63页
        4.3.1 转化温度对酶催化反应的影响第60页
        4.3.2 pH对酶催化反应的影响第60-61页
        4.3.3 菌体浓度对酶催化反应的影响第61-62页
        4.3.4 底物浓度对酶催化反应的影响第62-63页
    4.4 本章小结第63页
    参考文献第63-65页
第五章 结论与展望第65-67页
    5.1 结论第65-66页
    5.2 展望第66-67页
攻读学位期间发表学术论文第67-68页
致谢第68页

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