| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第17-26页 |
| 1.1 肾上腺髓质素 | 第17-20页 |
| 1.1.1 肾上腺髓质素简介 | 第17页 |
| 1.1.2 肾上腺髓质素信号通路 | 第17-18页 |
| 1.1.3 肾上腺髓质素与癌症 | 第18-20页 |
| 1.2 RNAi | 第20-24页 |
| 1.2.1 RNAi的简介 | 第20-21页 |
| 1.2.2 RNAi的机制 | 第21-24页 |
| 1.3 本研究的目的、内容及技术路线 | 第24-26页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第24页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 AM及其受体CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3在胃癌组织细胞中表达的差异性研究 | 第26-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-29页 |
| 2.1.1 细胞株及临床标本 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.2 实验过程 | 第29-33页 |
| 2.2.1 不同胃癌细胞株中AM的绝对表达量 | 第29-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-39页 |
| 2.3.1 不同胃癌细胞株中AM的绝对表达量 | 第33-34页 |
| 2.3.2 五种胃癌细胞株AM表达量 | 第34-35页 |
| 2.3.3 AM表达量与临床病理之间的关系 | 第35-36页 |
| 2.3.4 胃癌临床标本的生存分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5 免疫组织化学染色法检测胃癌标本AM及其受体的表达量 | 第37-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 siRNA干扰片段对胃癌细胞功能学的影响 | 第40-56页 |
| 3.1 干扰RNA的设计和筛选 | 第40-42页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第42-43页 |
| 3.2.2 siRNA干扰片段的设计与筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.3 流式细胞仪分析细胞凋亡及凋亡通路 | 第44页 |
| 3.2.4 Transwell法检测细胞侵袭的能力 | 第44-45页 |
| 3.2.5 划痕实验检测细胞的迁移能力 | 第45-46页 |
| 3.2.6 平板克隆增殖实验检测细胞的增殖能力 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-55页 |
| 3.3.1 荧光定量PCR的溶解曲线和溶解峰值 | 第47页 |
| 3.3.2 优化转染条件 | 第47-48页 |
| 3.3.3 筛选有效AM-si RNA | 第48-49页 |
| 3.3.4 流式细胞仪分析细胞凋亡率 | 第49-50页 |
| 3.3.5 验证凋亡通路 | 第50-51页 |
| 3.3.6 Transwell法检测细胞侵袭的能力 | 第51-52页 |
| 3.3.7 划痕实验检测细胞的迁移能力 | 第52-53页 |
| 3.3.8 平板克隆增殖实验检测细胞的增殖能力 | 第53-54页 |
| 3.3.9 siRNA-AM信号通路的验证 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 AM与自噬的关系 | 第56-64页 |
| 4.1 过表达质粒的构建 | 第56-59页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.1.2 实验仪器试剂 | 第56-58页 |
| 4.1.3 pcDNA-AM重组质粒的构建与筛选 | 第58-59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 GFP-LC3载体和AM-siRNA、pcDNA-AM分别转染胃癌细胞 | 第59-60页 |
| 4.2.2 自噬相关蛋白的Western-blot分析 | 第60页 |
| 4.2.3 共聚焦显微镜下观察自噬体的形成 | 第60页 |
| 4.3 实验结果 | 第60-63页 |
| 4.3.1 过表达载体测序验证结果 | 第60-61页 |
| 4.3.2 自噬相关蛋白的Western-blot分析 | 第61-62页 |
| 4.3.3 共聚焦显微镜下观察自噬体的形成 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 第五章 主要结论及展望 | 第64-66页 |
| 5.1 主要结论 | 第64页 |
| 5.2 主要展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第72页 |
