| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-32页 |
| 第一章 细胞重编程与猪体细胞克隆概述 | 第15-21页 |
| 1. 细胞重编程方法 | 第15-19页 |
| 2. 猪体细胞克隆研究进展 | 第19-21页 |
| 第二章 诱导多能干细胞简介与应用 | 第21-29页 |
| 1. iPSCs技术分类 | 第21-25页 |
| 2. 重编程中转录因子和小分子 | 第25-26页 |
| 3. iPSCs中源头细胞与重编程动态过程 | 第26-27页 |
| 4. iPSCs的质量与应用 | 第27-29页 |
| 第三章 猪诱导多能干细胞研究进展 | 第29-32页 |
| 试验研究 | 第32-71页 |
| 第四章 猪成纤维细胞的建系与体细胞核移植 | 第32-44页 |
| 引言 | 第32-33页 |
| 1 材料与方法 | 第33-39页 |
| 1.1 试验动物与细胞 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33-35页 |
| 1.3 试验方法 | 第35-39页 |
| 1.3.1 PEFs建系 | 第35页 |
| 1.3.2 APEFs建系 | 第35-36页 |
| 1.3.3 ADSCs建系 | 第36页 |
| 1.3.4 细胞培养、冻存和复苏 | 第36-37页 |
| 1.3.5 生长曲线制作 | 第37页 |
| 1.3.6 猪卵母细胞体外成熟 | 第37-38页 |
| 1.3.7 卵丘去除 | 第38页 |
| 1.3.8 供体细胞准备 | 第38页 |
| 1.3.9 核移植操作 | 第38页 |
| 1.3.10 融合与重构胚培养 | 第38-39页 |
| 1.3.11 数据统计 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-42页 |
| 2.1 猪成纤维细胞的建系和生长曲线 | 第39-41页 |
| 2.2 三种供体细胞的核移植及重构胚特征 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 3.1 APEFs和PEFs建系 | 第42页 |
| 3.2 三种供体细胞的重构胚比较 | 第42-44页 |
| 第五章 成纤维细胞与ADSCs源猪iPSCs建系 | 第44-60页 |
| 引言 | 第44-45页 |
| 1 材料与方法 | 第45-52页 |
| 1.1 试验动物与细胞 | 第45页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第45页 |
| 1.3 主要仪器与试剂 | 第45-47页 |
| 1.3.1 主要仪器与耗材 | 第45-46页 |
| 1.3.2 主要试剂与试剂盒 | 第46页 |
| 1.3.3 相关试剂配制 | 第46-47页 |
| 1.4 试验方法 | 第47-52页 |
| 1.4.1 MEFs建系 | 第47页 |
| 1.4.2 饲养层制备 | 第47-48页 |
| 1.4.3 质粒大量制备 | 第48页 |
| 1.4.4 病毒包装 | 第48-49页 |
| 1.4.5 病毒滴度测定 | 第49页 |
| 1.4.6 猪iPSCs诱导 | 第49-50页 |
| 1.4.7 碱性磷酸酶染色 | 第50-51页 |
| 1.4.8 猪iPSCs荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 1.4.9 猪iPSCs免疫荧光染色 | 第52页 |
| 1.4.10 猪iPSCs体外分化 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-59页 |
| 2.1 质粒的提取和病毒包装 | 第52-53页 |
| 2.2 APEFs, PEFs和ADSCs的重编程过程 | 第53-55页 |
| 2.3 猪胚胎成纤维细胞源iPSCs建系 | 第55-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 第六章 可溶性EGFP-11R和猪源SOX2-11R重组蛋白制备 | 第60-71页 |
| 引言 | 第60页 |
| 1 材料与方法 | 第60-66页 |
| 1.1 主要试剂盒与试剂 | 第60-61页 |
| 1.2 主要试剂的配置 | 第61-62页 |
| 1.3 试验方法 | 第62-66页 |
| 1.3.1 pET30a-EGFP-11R载体构建 | 第62页 |
| 1.3.2 pET30a-SOX2-11R载体构建 | 第62-63页 |
| 1.3.3 重组质粒转化 | 第63页 |
| 1.3.4 重组蛋白表达 | 第63页 |
| 1.3.5 菌体破碎 | 第63-64页 |
| 1.3.6 重组蛋白纯化 | 第64页 |
| 1.3.7 考马斯亮蓝染色 | 第64-65页 |
| 1.3.8 蛋白免疫印记 | 第65-66页 |
| 1.3.9 重组蛋白与细胞共孵育 | 第66页 |
| 2 结果 | 第66-69页 |
| 2.1 载体构建和EGFP-11R制备 | 第66-67页 |
| 2.2 EGFP-11R蛋白穿透细胞膜 | 第67页 |
| 2.3 载体构建和SOX2-11R制备 | 第67-69页 |
| 2.4 SOX2-11R蛋白穿透细胞膜 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 个人简历 | 第83-85页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第85页 |
