| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第17-42页 |
| 1.1 谷氨酰胺转胺酶简介 | 第17-29页 |
| 1.1.1 制备途径 | 第17-19页 |
| 1.1.2 结构 | 第19-23页 |
| 1.1.3 不同来源的谷氨酰胺转胺酶的理化性质比较 | 第23-25页 |
| 1.1.4 微生物谷氨酰胺转胺酶作用机理和检测方法 | 第25-27页 |
| 1.1.4.1 作用机制 | 第25-26页 |
| 1.1.4.2 检测方法 | 第26-27页 |
| 1.1.5 酶原成熟过程 | 第27-29页 |
| 1.2 谷氨酰胺转胺酶的应用 | 第29-31页 |
| 1.2.1 食品加工 | 第29-30页 |
| 1.2.2 纺织品行业 | 第30页 |
| 1.2.3 生物医药领域 | 第30-31页 |
| 1.3 微生物谷氨酰胺转胺酶研究现状 | 第31-36页 |
| 1.3.1 菌种诱变 | 第31-33页 |
| 1.3.2 发酵条件及工艺的优化 | 第33-34页 |
| 1.3.3 添加发酵促进剂提高酶活 | 第34-35页 |
| 1.3.4 谷氨酰胺转胺酶的分子克隆和基因工程菌的构建 | 第35-36页 |
| 1.3.5 寻找谷氨酰胺转胺酶新的应用前景 | 第36页 |
| 1.4 微生物谷氨酰胺转胺酶生产和研究面临的难题 | 第36-39页 |
| 1.4.1 缺乏优良的生长菌株 | 第36-37页 |
| 1.4.2 菌体发酵状态难以控制 | 第37-39页 |
| 1.5 本课题的研究背景、目的意义与主要内容 | 第39-42页 |
| 1.5.1 立题背景与意义 | 第39-40页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第40-42页 |
| 第二章 高通量筛选方法的建立 | 第42-53页 |
| 2.1 前言 | 第42页 |
| 2.2 材料和仪器 | 第42-44页 |
| 2.2.1 材料 | 第42-43页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第43-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 2.3.1 孢子斜面培养方法 | 第44页 |
| 2.3.2 高通量初筛方法的确定 | 第44-45页 |
| 2.3.2.1 CAF显色法高通量初筛可行性分析 | 第44页 |
| 2.3.2.2 96孔板高通量初筛发酵条件优化 | 第44-45页 |
| 2.3.3 试管复筛发酵时间的确定 | 第45页 |
| 2.3.4 摇瓶发酵 | 第45页 |
| 2.3.5 试管和摇瓶发酵酶活测定 | 第45-46页 |
| 2.3.6 甘油含量测定 | 第46页 |
| 2.3.7 生物量测定 | 第46页 |
| 2.3.8 数据分析 | 第46页 |
| 2.4 结果分析 | 第46-51页 |
| 2.4.1 CAF显色 | 第46-47页 |
| 2.4.1.1 CAF显色法 | 第46页 |
| 2.4.1.2 CAF显色法可靠性分析 | 第46-47页 |
| 2.4.2 96孔板发酵条件优化 | 第47-49页 |
| 2.4.2.1 96孔板发酵接种量的确定 | 第47页 |
| 2.4.2.2 96孔板发酵装液量的确定 | 第47-48页 |
| 2.4.2.3 96孔板发酵时间的确定 | 第48-49页 |
| 2.4.3 试管发酵时间曲线 | 第49页 |
| 2.4.4 摇瓶发酵时间进程 | 第49-51页 |
| 2.5 讨论 | 第51-52页 |
| 2.6 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 高通量诱变筛选 | 第53-62页 |
| 3.1 前言 | 第53页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第53页 |
| 3.2.1 材料 | 第53页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 3.3.1 茂原轮枝链霉菌的紫外(Uv)诱变 | 第53-54页 |
| 3.3.1.1 不完全孢子悬液制备与紫外诱变(NUV) | 第53-54页 |
| 3.3.1.2 完全孢子液紫外诱变(SUV) | 第54页 |
| 3.3.1.3 紫外和氯化锂复合诱变(UL/SUL) | 第54页 |
| 3.3.1.4 完全菌丝体诱变(MUV) | 第54页 |
| 3.3.2 高通量初筛 | 第54-55页 |
| 3.3.2.1 CAF显色法高通量初筛 | 第54-55页 |
| 3.3.2.2 96孔板高通量初筛 | 第55页 |
| 3.3.3 试管复筛 | 第55页 |
| 3.3.4 摇瓶验证 | 第55页 |
| 3.3.5 分离纯化 | 第55页 |
| 3.3.6 40%甘油保种 | 第55-56页 |
| 3.3.7 酶活测定方法 | 第56页 |
| 3.4 结果与分析 | 第56-60页 |
| 3.4.1 茂原轮枝链霉菌诱变 | 第56-58页 |
| 3.4.1.1 紫外诱变条件 | 第56-57页 |
| 3.4.1.2 氯化锂诱变 | 第57-58页 |
| 3.4.2 CAF显色法高通量筛选通路 | 第58页 |
| 3.4.3 96孔板高通量筛选体系 | 第58-60页 |
| 3.4.3.1 NUV诱变株高通量筛选 | 第58页 |
| 3.4.3.2 SUV诱变株高通量筛选 | 第58页 |
| 3.4.3.3 SUL诱变株高通量筛选 | 第58-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-61页 |
| 3.6 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 分散剂对茂原轮枝链霉菌发酵代谢的影响 | 第62-108页 |
| 4.1 前言 | 第62页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第62-64页 |
| 4.2.1 材料 | 第62-64页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-68页 |
| 4.3.1 摇瓶发酵 | 第64-65页 |
| 4.3.2 MTG酶活测定 | 第65页 |
| 4.3.4 DCW测定 | 第65页 |
| 4.3.5 蔗糖和可溶性淀粉琼脂平板培养 | 第65页 |
| 4.3.6 蔗糖、甘油和DCW的测量方法测定方法 | 第65-66页 |
| 4.3.6.1 蔗糖检测方法 | 第65页 |
| 4.3.6.2 甘油含量测定 | 第65页 |
| 4.3.6.3 甘油和蔗糖测定干扰试验和发酵过程蔗糖消化实验 | 第65-66页 |
| 4.3.7 不同添加剂发酵培养基发酵时间进程 | 第66页 |
| 4.3.7.1 CM发酵培养基的发酵时间曲线 | 第66页 |
| 4.3.7.2 果胶发酵培养基的发酵时间曲线 | 第66页 |
| 4.3.7.3 蔗糖发酵培养基的发酵时间和灭菌条件对发酵效率的影响 | 第66页 |
| 4.3.8 SDS.PAGE | 第66-67页 |
| 4.3.8.1 样品处理 | 第66-67页 |
| 4.3.8.2 SDS-PAGE | 第67页 |
| 4.3.9 Westem blot | 第67-68页 |
| 4.3.10 显微镜观察 | 第68页 |
| 4.4 结果与分析 | 第68-104页 |
| 4.4.1 明胶对发酵法制备MTG的影响 | 第68-71页 |
| 4.4.2 琼脂对发酵法制备MTG的影响 | 第71-72页 |
| 4.4.3 可溶性淀粉对发酵法制备MTG的影响 | 第72-74页 |
| 4.4.4 罗望子对发酵法制备MTG的影响 | 第74-76页 |
| 4.4.5 CM对茂原轮枝链霉菌发酵代谢的影响 | 第76-85页 |
| 4.4.5.1 不同浓度CM对茂原轮枝链霉菌发酵代谢的影响初探 | 第76-78页 |
| 4.4.5.2 CM发酵培养液中茂原轮枝链霉菌的代谢特征 | 第78-80页 |
| 4.4.5.3 SDS-PAGE | 第80-82页 |
| 4.4.5.4 Western blot | 第82-83页 |
| 4.4.5.5 显微镜观察 | 第83-85页 |
| 4.4.6 果胶对茂原轮枝链霉菌发酵代谢的影响 | 第85-93页 |
| 4.4.6.1 不同浓度果胶对茂原轮枝链霉菌发酵的影响 | 第85-86页 |
| 4.4.6.2 茂原轮枝链霉菌在3 g/L果胶发酵培养基中的代谢特征 | 第86-88页 |
| 4.4.6.3 SDS-PAGE | 第88-90页 |
| 4.4.6.4 Western blot | 第90页 |
| 4.4.6.5 显微镜观察 | 第90-91页 |
| 4.4.6.6 果胶和CM作用比较 | 第91-93页 |
| 4.4.7 蔗糖对茂原轮枝链霉菌发酵代谢的影响 | 第93-104页 |
| 4.4.7.1 蔗糖和甘油测定干扰试验 | 第93-95页 |
| 4.4.7.2 茂原轮枝链霉菌对蔗糖的利用效率 | 第95-98页 |
| 4.4.7.3 蔗糖培养基发酵初探 | 第98-100页 |
| 4.4.7.4 不同条件灭菌后蔗糖发酵培养基中茂原轮枝链霉菌产MTG的特征 | 第100-101页 |
| 4.4.7.5 SDS-PAGE | 第101-102页 |
| 4.4.7.6 Western blot | 第102-103页 |
| 4.4.7.7 显微镜观察 | 第103-104页 |
| 4.5 讨论 | 第104-106页 |
| 4.6 本章小结 | 第106-108页 |
| 第五章 其他添加剂对茂原轮枝链霉菌发酵代谢的影响 | 第108-126页 |
| 5.1 前言 | 第108-110页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第110-111页 |
| 5.2.1 材料 | 第110页 |
| 5.2.2 仪器与设备 | 第110-111页 |
| 5.3 实验方法 | 第111页 |
| 5.3.1 摇瓶发酵 | 第111页 |
| 5.3.2 CTAB和多粘菌素添加方法 | 第111页 |
| 5.3.3 MTG酶活测定方法 | 第111页 |
| 5.3.4 DCW测定 | 第111页 |
| 5.4 结果与分析 | 第111-123页 |
| 5.4.1 CTAB对茂原轮枝链霉菌发酵制备MTG水平的影响 | 第111-117页 |
| 5.4.1.1 不同浓度CTAB对发酵产MTG的作用效果 | 第112-113页 |
| 5.4.1.2 5g/LCTAB对茂原轮枝链霉菌发酵制备MTG的影响 | 第113-115页 |
| 5.4.1.3 SDS-PAGE | 第115-116页 |
| 5.4.1.4 Western blot | 第116-117页 |
| 5.4.2 多粘菌素对茂原轮枝链霉菌发酵产MTG的影响 | 第117-123页 |
| 5.4.2.1 Colistin对发酵法制备MTG的影响 | 第118-120页 |
| 5.4.2.2 Polymyxin B对发酵法制备MTG的影响 | 第120-123页 |
| 5.5 讨论 | 第123-124页 |
| 5.6 本章小结 | 第124-126页 |
| 全文总结与展望 | 第126-130页 |
| 附录一 CAF高通量筛选结果 | 第130-132页 |
| 一、试管复筛 | 第130-131页 |
| 二、摇瓶验证 | 第131-132页 |
| 附录二 96孔板高通量筛选结果 | 第132-142页 |
| 一、96孔板初筛 | 第132-139页 |
| 二、试管复筛 | 第139-141页 |
| 三、摇瓶验证 | 第141-142页 |
| 附录三 缩写 | 第142-143页 |
| 附录四 | 第143-144页 |
| 个人教育经历 | 第143页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第143页 |
| 参与项目 | 第143-144页 |
| 参考文献 | 第144-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
