| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 肌内脂肪的研究概况 | 第14页 |
| 1.1 肌内脂肪的特点 | 第14页 |
| 1.2 肌内脂肪的选育 | 第14页 |
| 2 骨骼肌内脂肪生成的分子调控机制 | 第14-18页 |
| 2.1 脂肪生成的关键调控因子 | 第15页 |
| 2.2 Hedgehog信号通路对脂肪生成的影响 | 第15-16页 |
| 2.3 Wnt信号通路对脂肪生成的影响 | 第16-17页 |
| 2.4 BMP信号通路对脂肪生成的影响 | 第17-18页 |
| 3 PAT蛋白家族研究概况 | 第18-26页 |
| 3.1 脂肪细胞与脂滴概述 | 第18页 |
| 3.2 PAT家族蛋白 | 第18-19页 |
| 3.3 perilipin | 第19-20页 |
| 3.4 ADRP | 第20-23页 |
| 3.5 TIP47、S3-12、OXPAT | 第23-26页 |
| 第二章 猪ADRP基因的克隆与分析及真核表达载体构建 | 第26-44页 |
| 1 材料和方法 | 第26-35页 |
| 1.1 实验动物及实验材料 | 第26-27页 |
| 1.2 引物设计 | 第27-28页 |
| 1.3 肌肉组织总RNA提取及检测 | 第28-29页 |
| 1.4 mRNA反转录 | 第29页 |
| 1.5 PCR扩增ORF区 | 第29-30页 |
| 1.6 ADRP基因编码区扩增 | 第30-32页 |
| 1.7 ADRP基因ORF区生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 1.8 猪ADRP真核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-42页 |
| 2.1 猪ADRP基因ORF序列扩增 | 第35页 |
| 2.2 猪ADRP基因染色体定位与结构分析 | 第35-36页 |
| 2.3 猪ADRP蛋白一级结构分析 | 第36-37页 |
| 2.4 ADRP蛋白的二、三级结构预测 | 第37-40页 |
| 2.5 ADRP不同物种间的多重比对 | 第40-41页 |
| 2.6 哺乳动物ADRP基因系统发育分析 | 第41-42页 |
| 2.7 猪ADRP基因真核表达载体的双酶切鉴定 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 猪ADRP基因核心启动子区的寻找与分析 | 第44-58页 |
| 1 试验材料 | 第44-45页 |
| 1.1 实验动物 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-51页 |
| 2.1 组织样DNA提取 | 第45页 |
| 2.2 启动子区引物设计 | 第45-46页 |
| 2.3 猪ADRP基因启动子区生物信息学分析 | 第46页 |
| 2.4 猪ADRP基因启动子的扩增及缺失表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 2.5 猪ADRP基因启动子区活性分析及功能验证 | 第48-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-55页 |
| 3.1 猪ADRP基因5'端序列扩增结果 | 第51页 |
| 3.2 猪ADRP基因5'端序列分析 | 第51-53页 |
| 3.3 重组表达载体KpnⅠ和HindⅢ双酶切鉴定 | 第53页 |
| 3.4 优化的转染条件 | 第53-54页 |
| 3.5 启动子活性分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 猪ADRP基因表达水平与启动子区甲基化状态关系研究 | 第58-70页 |
| 1 实验材料 | 第58-59页 |
| 1.1 试验动物 | 第58页 |
| 1.2 试验试剂 | 第58页 |
| 1.3 试验仪器 | 第58-59页 |
| 1.4 样品的准备 | 第59页 |
| 2 试验方法 | 第59-63页 |
| 2.1 肌内内粗脂肪的提取 | 第59页 |
| 2.2 肌肉样品RNA的提取及反转录 | 第59页 |
| 2.3 引物设计 | 第59-60页 |
| 2.4 Real-time PCR | 第60页 |
| 2.5 亚硫酸盐测序 | 第60-63页 |
| 2.6 统计分析 | 第63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-67页 |
| 3.1 IMF含量的测定结果 | 第63页 |
| 3.2 ADRP基因在IMF含量高低组中的表达 | 第63-64页 |
| 3.3 BSP方法对IMF含量高低组组织ADRP基因启动子区的甲基化分析 | 第64-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 第五章 猪ADRP基因过表达前体脂肪细胞分化影响研究 | 第70-78页 |
| 1 实验材料 | 第70页 |
| 1.1 试验材料 | 第70页 |
| 1.2 主要试剂 | 第70页 |
| 1.3 仪器设备 | 第70页 |
| 2 实验方法 | 第70-73页 |
| 2.1 猪前体脂肪细胞的培养 | 第70-71页 |
| 2.2 细胞转染 | 第71-72页 |
| 2.3 转染后诱导细胞分化 | 第72页 |
| 2.4 油红O染色和提取 | 第72页 |
| 2.5 细胞总RNA提取 | 第72页 |
| 2.6 Real-time RT-PCR | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-76页 |
| 3.1 ADRP在脂肪细胞分化过程中的表达 | 第73-74页 |
| 3.2 质粒转染猪前体脂肪细胞对ADRP表达影响 | 第74页 |
| 3.3 过表达ADRP对猪脂肪细胞分化的影响 | 第74-75页 |
| 3.4 过表达ADRP对FABP4和PPARy基因表达的影响 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-90页 |
| 全文结论 | 第90-92页 |
| 创新点 | 第92-94页 |
| 附录一 主要溶液的配制 | 第94-96页 |
| 论文发表情况 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
