| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRCT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-37页 |
| 1.1 微生物次级代谢产物代谢调控的研究 | 第15-24页 |
| 1.1.1 放线菌次级代谢产物代谢调控研究的策略 | 第16-21页 |
| 1.1.2 多杀菌素产生代谢调控网络的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2 蛋白质组学在微生物次级代谢产物代谢调控研究中的应用 | 第24-34页 |
| 1.2.1 蛋白质组学的主要研究技术 | 第24-32页 |
| 1.2.2 蛋白质组学在次级代谢产物合成调控研究中的应用 | 第32-34页 |
| 1.3 立题依据和意义 | 第34-36页 |
| 1.4 研究技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 刺糖多孢菌不同生长发育时期蛋白质组研究 | 第37-62页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 材料与方法 | 第38-46页 |
| 2.2.1 菌株及培养条件 | 第38页 |
| 2.2.2 生理特性的研究 | 第38-39页 |
| 2.2.3 全菌体蛋白质的提取及SDS-PAGE检测 | 第39-40页 |
| 2.2.4 蛋白质的胰蛋白酶酶解 | 第40页 |
| 2.2.5 质谱鉴定酶解肽段 | 第40-43页 |
| 2.2.6 蛋白质数据库搜索 | 第43页 |
| 2.2.7 Label-free半定量分析蛋白质表达丰度差异 | 第43-44页 |
| 2.2.8 qRT-PCR检测 | 第44-46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-60页 |
| 2.3.1 刺糖多孢菌生长特性分析 | 第46-47页 |
| 2.3.2 刺糖多孢菌功能蛋白质组 | 第47-51页 |
| 2.3.3 生长过程的压力响应和氧化还原平衡 | 第51-52页 |
| 2.3.4 初级代谢 | 第52-54页 |
| 2.3.5 全局性调控因子 | 第54-56页 |
| 2.3.6 多杀菌素的生物合成 | 第56-59页 |
| 2.3.7 qRT-PCR验证 | 第59-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 突变菌株S. spinosa ΔmetE的构建及其生理特性 | 第62-79页 |
| 3.1 引言 | 第62-63页 |
| 3.2 材料与方法 | 第63-67页 |
| 3.2.1 菌株及培养条件 | 第63-64页 |
| 3.2.2 metE基因的克隆及载体pOJ260-metE的构建 | 第64-65页 |
| 3.2.3 接合转移及突变菌株S. spinosa ΔmetE的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.2.4 生理特性研究 | 第66-67页 |
| 3.3 结果与分析 | 第67-77页 |
| 3.3.1 载体pOJ260-metE的构建及验证 | 第67-68页 |
| 3.3.2 突变株S. spinosa ΔmetE的构建及验证 | 第68-73页 |
| 3.3.3 metE基因阻断后在液体培养基中的生长差异 | 第73-75页 |
| 3.3.4 metE基因敲除后对菌株产孢子情况的影响 | 第75-77页 |
| 3.3.5 接合子的遗传稳定性 | 第77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 蛋白质组学技术剖析S. spinosa对metE基因阻断的新陈代谢适应 | 第79-101页 |
| 4.1 引言 | 第79-80页 |
| 4.2 材料与方法 | 第80-83页 |
| 4.2.1 菌株及培养条件 | 第80页 |
| 4.2.2 蛋白质的提取及SDS-PAGE分析 | 第80页 |
| 4.2.3 菌体全蛋白的胰蛋白酶酶解 | 第80页 |
| 4.2.4 2D-LC-MS/MS鉴定 | 第80页 |
| 4.2.5 数据处理 | 第80-81页 |
| 4.2.6 蛋白质半定量及生物信息学分析 | 第81页 |
| 4.2.7 Western blotting鉴定 | 第81-83页 |
| 4.3 结果与分析 | 第83-99页 |
| 4.3.1 全局性比较蛋白质组学分析 | 第83-84页 |
| 4.3.2 功能分类 | 第84-87页 |
| 4.3.3 糖酵解与TCA | 第87-90页 |
| 4.3.4 磷酸戊糖途径及ED途径 | 第90-91页 |
| 4.3.5 糖异生作用 | 第91-92页 |
| 4.3.6 谷氨酸和天冬氨酸代谢 | 第92-93页 |
| 4.3.7 甲硫氨酸代谢及SAM循环 | 第93-96页 |
| 4.3.8 Western blotting验证 | 第96-99页 |
| 4.4 讨论 | 第99-101页 |
| 第五章 研究结论与展望 | 第101-104页 |
| 5.1 主要研究结论 | 第101-102页 |
| 5.2 展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-119页 |
| 附录 | 第119-133页 |
| 论文发表情况 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 本论文感谢以下基金项目的资助 | 第135页 |
