| 摘要 | 第4-8页 |
| 英文摘要 | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-42页 |
| 1 miRNA的简介 | 第19-26页 |
| 1.1 miRNA的发现与命名 | 第19-20页 |
| 1.2 miRNA的作用机理 | 第20-21页 |
| 1.3 miRNA的生物合成 | 第21页 |
| 1.4 miRNA的调控机制 | 第21-23页 |
| 1.5 miRNA的预测及靶基因鉴定 | 第23-26页 |
| 2 高通量测序技术(High-throughput sequencing,HTS) | 第26-29页 |
| 2.1 HST在基因组学研究中的应用 | 第27页 |
| 2.2 HTS在转录组学研究中的应用 | 第27-28页 |
| 2.3 HST在表观遗传学上的应用 | 第28-29页 |
| 3 miRNA调节功能的研究 | 第29-32页 |
| 3.1 体外调节 | 第29-31页 |
| 3.2 机体内调节 | 第31-32页 |
| 4 miRNA在乳腺中的研究概况 | 第32-42页 |
| 4.1 在奶山羊乳腺中的研究现状 | 第32-33页 |
| 4.2 在奶牛乳腺中的研究现状 | 第33页 |
| 4.3 miRNA与炎症条件下奶牛乳腺发育和乳汁分泌 | 第33-35页 |
| 4.4 microRNA在泌乳研究中的标准内参选择问题 | 第35-36页 |
| 4.5 在泌乳中的研究进展 | 第36-39页 |
| 4.6 miRNA跨物种研究及生物应用 | 第39-40页 |
| 4.7 水牛乳腺miRNA研究的意义 | 第40-42页 |
| 第二章 水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织miRNA差异表达谱分析 | 第42-58页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 试验材料 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第44页 |
| 1.3 试验方法 | 第44-46页 |
| 1.4 技术路线 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-55页 |
| 2.1 荷斯坦奶牛与奶水牛乳成分比较分析 | 第46-47页 |
| 2.2 水牛泌乳期和非泌乳期miRNA表达谱构建 | 第47-48页 |
| 2.3 水牛乳腺组织新miRNA的鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4 候选miRNAs的第一个核苷酸偏好性分析 | 第49-50页 |
| 2.5 miRNA在染色体上的分布 | 第50-53页 |
| 2.6 水牛泌乳期与非泌乳期miRNAs的差异表达 | 第53-55页 |
| 2.7 靶基因和信号通路预测 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 第三章 水牛泌乳期和非泌乳期差异表达miRNA筛选与QRT-PCR验证 | 第58-71页 |
| 引言 | 第59页 |
| 1 试验材料与方法 | 第59-62页 |
| 1.1 试验材料 | 第59页 |
| 1.2 试验方法 | 第59-61页 |
| 1.3 数据统计与分析 | 第61-62页 |
| 2. 结果与分析 | 第62-69页 |
| 2.1 测序筛选差异表达miRNA的反转录和QRT-PCR引物的设计和验证 | 第62-65页 |
| 2.2 主要表达的9个已知miRNA的筛选及QRT-PCR验证 | 第65-67页 |
| 2.3 低丰度4个非泌乳期及泌乳期特异表达的miRNA筛选和验证 | 第67-68页 |
| 2.4 高丰度表达的5个未知miRNA的筛选及验证 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 4 结论 | 第70-71页 |
| 第四章 水牛Bbu-miR-103作用靶基因PANK3的功能研究及其对水牛乳脂通路调控作用分析 | 第71-92页 |
| 引言 | 第72页 |
| 1 材料与方法 | 第72-76页 |
| 1.1 试验材料 | 第72页 |
| 1.2 试验方法 | 第72-75页 |
| 1.3 技术路线 | 第75-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-89页 |
| 2.1 慢病毒质粒的构建 | 第76-77页 |
| 2.2 过表达bbu-mir-103的包装和病毒扩繁 | 第77-81页 |
| 2.3 bbu-mir-103慢病毒质粒在Bcap-37细胞上的感染效果试验 | 第81-82页 |
| 2.4 慢病毒介导miRNA-103中的过表达结果 | 第82-85页 |
| 2.5 过表达和抑制剂定量结果分析 | 第85-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| 3.1 过表达和抑制miRNA的研究 | 第89页 |
| 3.2 水牛乳腺miR-103对靶基因PANK3及相关水牛乳脂代谢通路的调控作用 | 第89-90页 |
| 3.3 miR-103有望应用在2型糖尿病中治疗中 | 第90-91页 |
| 4 结论 | 第91-92页 |
| 第五章 水牛Novel-miR-57在Bcap-37和水牛乳腺上皮细胞上的靶基因—DOK4的首次狩猎及验证 | 第92-117页 |
| 引言 | 第93页 |
| 1 材料与方法 | 第93-95页 |
| 1.1 材料 | 第93页 |
| 1.2 方法 | 第93-94页 |
| 1.3 技术路线 | 第94-95页 |
| 1.4 数据统计与分析 | 第95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-113页 |
| 2.1 Novel-miR-57的宿主基因测序结果 | 第95-96页 |
| 2.2 Novel-miR-57二级结构预测 | 第96页 |
| 2.3 Novel-miR-57靶基因预测 | 第96-98页 |
| 2.4 Novel-miR-57 Gene Ontology分析结果 | 第98-102页 |
| 2.5 KEGG信号通路预测 | 第102-103页 |
| 2.6 靶基因的QRT-PCR分析 | 第103-110页 |
| 2.7 预测靶基因DOK4在Bcap-37细胞系上的验证 | 第110页 |
| 2.8 预测靶基因DOK4在水牛乳腺细胞上的验证 | 第110-111页 |
| 2.9 DOK4的3'UTR区的克隆及预测结合位点验证 | 第111-112页 |
| 2.10 DOK4在水牛乳腺组织中的免疫组化结果分析 | 第112-113页 |
| 3. 讨论 | 第113-116页 |
| 3.1 miRNA靶基因的寻找 | 第113页 |
| 3.2 novle-57靶基因DOK4 | 第113-114页 |
| 3.3 过表达和抑制Novel-miR-57靶向上调和下调DOK4的表达 | 第114-116页 |
| 4 结论 | 第116-117页 |
| 论文总结论 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第126页 |
