| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-24页 |
| 第一章 猪链球菌和噬菌体裂解酶的研究进展 | 第12-20页 |
| 1 猪链球菌2型的研究概况 | 第12-17页 |
| ·病原特征 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·毒力因子和致病机理 | 第14-16页 |
| ·毒力因子 | 第14-15页 |
| ·SS2的致病机理 | 第15-16页 |
| ·耐药性的研究 | 第16-17页 |
| 2 噬菌体裂解酶的研究进展 | 第17-19页 |
| ·噬菌体裂解酶的分类 | 第17页 |
| ·裂解酶的结构域 | 第17-18页 |
| ·裂解酶的作用机制 | 第18页 |
| ·噬菌体裂解酶的作用特点 | 第18-19页 |
| ·发展趋势 | 第19页 |
| 3 本文的研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第二篇 实验研究 | 第24-64页 |
| 第二章 噬菌体裂解酶LySMP的制备与条件优化 | 第24-42页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·目的片段的获得 | 第25-26页 |
| ·PCR模板的制备 | 第25页 |
| ·引物设计和合成 | 第25页 |
| ·PCR反应体系与反应条件 | 第25-26页 |
| ·表达载体Lysin-pET-28a的构建 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第26页 |
| ·酶切反应 | 第26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·转化及转化产物的鉴定 | 第27页 |
| ·Lysin-pET-28a转化至表达菌BL21中 | 第27页 |
| ·LySMP融合蛋白的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE凝胶制备 | 第28页 |
| ·电泳 | 第28页 |
| ·染色与脱色 | 第28页 |
| ·重组菌表达诱导条件的优化 | 第28-29页 |
| ·诱导温度的优化 | 第28-29页 |
| ·诱导剂浓度的优化 | 第29页 |
| ·诱导时间的优化 | 第29页 |
| ·裂解酶的纯化 | 第29-31页 |
| ·样品的制备 | 第29页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| ·考马斯亮蓝法(Bradford)测重组蛋白浓度 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白LySMP的Western-blotting分析 | 第31页 |
| ·LySMP的SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| ·转膜 | 第31页 |
| ·酶谱实验 | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-38页 |
| ·LySMP基因片段的扩增和重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第32页 |
| ·蛋白表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第32-33页 |
| ·重组菌表达诱导条件的优化 | 第33-35页 |
| ·诱导温度的优化 | 第33页 |
| ·诱导剂浓度的优化 | 第33-34页 |
| ·诱导时间的优化 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白LySMP的Western-blotting分析 | 第37-38页 |
| ·酶谱实验 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 第三章 噬菌体裂解酶LySMP的生物学特性及其活性定义 | 第42-54页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要酶和试剂 | 第43页 |
| ·最佳pH的确定 | 第43-44页 |
| ·LySMP的活性定义 | 第44页 |
| ·LySMP作用于猪链球菌后的细菌计数 | 第44-45页 |
| ·菌液的培养 | 第44页 |
| ·菌液OD_(600)值的测定及细菌稀释计数 | 第44-45页 |
| ·LySMP作用猪链球菌后的浊度测定及活菌计数 | 第45页 |
| ·LySMP对其他致病菌株的裂解 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| ·最佳pH的确定 | 第45-46页 |
| ·LySMP的活性定义 | 第46页 |
| ·LySMP对猪链球菌的作用及活菌计数 | 第46-48页 |
| ·LySMP对其他致病菌的裂解研究 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第四章 噬菌体裂解酶LySMP的冻干工艺研究 | 第54-64页 |
| 1 材料与方法 | 第55-56页 |
| ·主要材料 | 第55页 |
| ·噬菌体裂解酶LySMP的获得和SS2-4的处理 | 第55页 |
| ·不同浓度甘油对保存裂解酶LySMP活性的影响 | 第55页 |
| ·储存温度对保存裂解酶LySMP活性的影响 | 第55页 |
| ·裂解酶LySMP的冷冻干燥 | 第55-56页 |
| ·冻干保护剂的初步选择 | 第55-56页 |
| ·不同冻干保护剂的正交设计实验 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-59页 |
| ·不同浓度甘油对裂解酶LySMP活性的影响 | 第56页 |
| ·储存温度对裂解酶LySMP活性的影响 | 第56-57页 |
| ·冻干保护剂的初步选择 | 第57-58页 |
| ·不同冻干保护剂的正交设计实验 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录 | 第64-70页 |
| 全文总结 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
