| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-42页 |
| 第一章 猪链球菌2型的研究进展 | 第14-30页 |
| 1 病原学 | 第14页 |
| 2 流行病学 | 第14-15页 |
| 3 临床症状和病理变化 | 第15-16页 |
| ·临床症状 | 第15-16页 |
| ·病理变化 | 第16页 |
| 4 猪链球菌2型的毒力(相关)因子 | 第16-21页 |
| ·荚膜多糖(Capsular poLysaccharide,CPS) | 第16-17页 |
| ·溶菌酶释放蛋白(Muramidase Released Protein,MRP)与胞外因子(Extracellarprotein Factor, EF) | 第17-18页 |
| ·猪溶血素(Suilysin,SLY) | 第18页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白(Fibronectin and Fibrinogen binding protein,FBPS) | 第18-19页 |
| ·谷氨酸脱氢酶(GDH) | 第19页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) | 第19-20页 |
| ·毒力相关序列orf2 | 第20页 |
| ·其他的毒力因子 | 第20-21页 |
| 5 猪链球菌2型基因工程亚单位疫苗的研究进展 | 第21-24页 |
| ·荚膜多糖(CPS) | 第21页 |
| ·溶菌酶释放蛋白MRP和细胞外因子EF | 第21-22页 |
| ·溶血素(SLY) | 第22-23页 |
| ·SS2其他亚单位疫苗研究 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-30页 |
| 第二章 猪胸膜肺炎放线杆菌的研究进展 | 第30-42页 |
| 1 病原学 | 第30页 |
| 2 流行病学 | 第30-31页 |
| 3 临床症状和病理变化 | 第31-32页 |
| ·临床症状 | 第31页 |
| ·病理变化 | 第31-32页 |
| 4 猪胸膜肺炎放线杆菌的毒力(相关)因子 | 第32-34页 |
| ·溶血毒素Apx(haemolysins) | 第32-33页 |
| ·荚膜多糖(Capsular Polysaccharide,CPS) | 第33页 |
| ·脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS) | 第33-34页 |
| ·外膜蛋白(Outer Membrane Proteins,OMP) | 第34页 |
| ·转铁结合蛋白(Transferrin Binding Proteins,Tbp) | 第34页 |
| 5 猪胸膜肺炎放线杆菌基因工程亚单位疫苗的研究进展 | 第34-37页 |
| ·溶血毒素Apx(haemolysins) | 第35页 |
| ·转铁结合蛋白(Transferrin Binding Proteins,Tbp) | 第35-36页 |
| ·外膜蛋白(Outer Membrane Proteins,OMP) | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 第二篇 试验部分 | 第42-96页 |
| 第三章 猪链球菌2型MRP亚单位疫苗的研究 | 第42-64页 |
| 1 材料与方法 | 第43-52页 |
| ·菌株与质粒 | 第43页 |
| ·主要酶和试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43-44页 |
| ·目的基因的PCR扩增与回收 | 第44-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第44页 |
| ·PCR扩增体系与条件 | 第44-45页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第45页 |
| ·目的基因的A/T克隆 | 第45-46页 |
| ·A/T连接反应体系 | 第45页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·连接产物的转化 | 第46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| ·重组质粒mrp-pET28a和sly-pET28a的构建 | 第46-48页 |
| ·重组质粒mrp-pMD18T、sly-pMD18T和pET-28a(+)的双酶切 | 第46-47页 |
| ·mrp、sly基因片段与质粒载体pET-28a(+)的连接 | 第47页 |
| ·感受态细胞的制备(方法同上) | 第47-48页 |
| ·连接产物转化(方法同上) | 第48页 |
| ·原核表达载体mrp-pET28a和sly-pET28a的双酶切鉴定 | 第48页 |
| ·重组蛋MRP和SLY亚单位的诱导表达 | 第48-49页 |
| ·阳性质粒转化入表达菌BL21 | 第48-49页 |
| ·时间梯度诱导表达 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第49页 |
| ·染色与脱色 | 第49页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的大量诱导 | 第49-50页 |
| ·包涵体的纯化 | 第50页 |
| ·重组蛋白的Western blotting分析 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的动物实验 | 第51-52页 |
| ·疫苗制备 | 第51页 |
| ·疫苗免疫Balb/C小鼠及免疫血清的收集 | 第51页 |
| ·间接ELISA法测定重组蛋白亚单位疫苗免疫后的Balb/C小鼠体内的抗体动态效价 | 第51-52页 |
| ·动物免疫保护试验 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-58页 |
| ·mrp和sly基因的PCR | 第52-53页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·测序 | 第54页 |
| ·重组质粒mrp-pET28a和sly-pET28a在BL21中的表达 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白的纯化及western blotting分析结果 | 第56-57页 |
| ·重组蛋MRP和SLY在Balb/C小鼠体内的抗体产生动态 | 第57-58页 |
| ·免疫保护试验 | 第58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 第四章 猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIA亚单位疫苗的研究 | 第64-78页 |
| 1 材料 | 第65-70页 |
| ·菌株与质粒 | 第65页 |
| ·主要酶和试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·试验动物 | 第65页 |
| ·目的基因的PCR扩增与回收 | 第65-66页 |
| ·目的基因的A/T克隆 | 第66-67页 |
| ·A/T连接反应体系 | 第66-67页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第67页 |
| ·连接产物的转化 | 第67页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第67页 |
| ·重组质粒ApxIA-pET28a的构建 | 第67-69页 |
| ·重组质粒ApxIA-pMD18T和pET-28a(+)的双酶切 | 第67-68页 |
| ·ApxIA片段与质粒载体pET-28a(+)的连接 | 第68页 |
| ·感受态细胞的制备(方法同上) | 第68页 |
| ·连接产物转化(方法同上) | 第68页 |
| ·原核表达载体ApxIA-pET28a的双酶切鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白ApxIA亚单位的诱导表达 | 第69页 |
| ·阳性质粒转化入表达菌BL21 | 第69页 |
| ·时间梯度诱导表达 | 第69页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第69页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第69页 |
| ·重组蛋白的Western blotting分析 | 第69页 |
| ·重组蛋白ApxIA的动物试验 | 第69-70页 |
| ·疫苗制备 | 第69页 |
| ·单位疫苗免疫ICR小鼠以及免疫血清的收集 | 第69-70页 |
| ·间接ELISA法测定重组蛋白亚单位疫苗免疫后的ICR小鼠体内的抗体动态效价 | 第70页 |
| ·动物免疫保护试验 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-75页 |
| ·ApxIA基因的PCR | 第70-71页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第71页 |
| ·测序 | 第71-72页 |
| ·重组质粒ApxIA-pET28a在BL21中的表达 | 第72-73页 |
| ·重组蛋白的纯化及western blotting分析 | 第73页 |
| ·重组蛋白ApxIA在ICR小鼠体内的抗体产生动态 | 第73-74页 |
| ·免疫保护试验 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
| 第五章 MRP和ApxIA亚单位的串联表达及其相关研究 | 第78-96页 |
| 1 材料 | 第79-85页 |
| ·菌株与质粒 | 第79页 |
| ·主要酶和试剂 | 第79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·试验动物 | 第79页 |
| ·目的基因的PCR扩增与回收 | 第79-82页 |
| ·引物设计与合成 | 第79-80页 |
| ·串联PCR扩增方法 | 第80-81页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第81-82页 |
| ·ApxIA-linker-mrp基因的A/T克隆 | 第82页 |
| ·A/T连接反应体系 | 第82页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第82页 |
| ·连接产物的转化 | 第82页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第82页 |
| ·重组质粒ApxIA-mrp-pET28a的构建 | 第82-83页 |
| ·重组质粒ApxIA-mrp-pMD18T和pET-28a(+)的双酶切 | 第82-83页 |
| ·ApxIA-mrp片段与质粒载体pET-28a(+)的连接 | 第83页 |
| ·连接产物转化(方法同上) | 第83页 |
| ·原核表达载体ApxIA-mrp-pET28a的双酶切鉴定 | 第83页 |
| ·重组串联ApxIA-mrp蛋白亚单位的诱导表达 | 第83-84页 |
| ·重组阳性质粒转入表达菌BL21 | 第83-84页 |
| ·时间梯度诱导表达 | 第84页 |
| ·SDS-PAGE检测重组串联蛋白ApxIA-MRP的表达 | 第84页 |
| ·重组融合蛋白的纯化 | 第84页 |
| ·重组串联蛋白ApxIA-MRP的Western blotting分析 | 第84页 |
| ·重组串联蛋白ApxIA-MRP的动物实验 | 第84-85页 |
| ·串联蛋白亚单位疫苗的制备 | 第84页 |
| ·串联亚单位疫苗免疫ICR小鼠以及免疫血清的收集 | 第84页 |
| ·间接ELISA法测定经ApxIA-MRP免疫的ICR小鼠体内的抗体动态效价 | 第84-85页 |
| ·动物免疫保护试验 | 第85页 |
| 2 结果 | 第85-92页 |
| ·串联基因ApxIA-mrp的PCR | 第85-86页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第86-87页 |
| ·测序 | 第87-88页 |
| ·重组质粒ApxIA-mrp-pET28a在BL21中的表达 | 第88页 |
| ·重组串联蛋白的纯化及westenrblo廿ing分析 | 第88-89页 |
| ·重组串联蛋白ApxIA-MRP在ICR小鼠及仔猪体内的抗体产生动态 | 第89-90页 |
| ·免疫保护试验 | 第90-92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
| 全文总结 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
