| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 番茄晚疫病的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.1.1 致病疫霉 | 第11页 |
| 1.1.2 番茄晚疫病 | 第11页 |
| 1.1.3 番茄晚疫病的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 miRNA概述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 miRNA的产生机制 | 第12-13页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机理 | 第13-14页 |
| 1.2.3 miRNA的功能 | 第14-16页 |
| 1.3 miRNA的研究方法 | 第16-20页 |
| 1.3.1 miRNA的发现方法 | 第16-19页 |
| 1.3.2 miRNA靶基因的研究方法 | 第19-20页 |
| 1.4 植物miR396的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4.1 miR396的保守性 | 第20页 |
| 1.4.2 miR396的功能 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 2 致病疫霉诱导下番茄小RNA文库的构建 | 第23-38页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料和试剂 | 第23页 |
| 2.2.1 数据分析软件 | 第23页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.3 实验试剂及仪器 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.3.1 致病疫霉孢子悬浮液的制备 | 第23-24页 |
| 2.3.2 番茄植株的处理 | 第24页 |
| 2.3.3 总RNA提取 | 第24页 |
| 2.3.4 电泳检测 | 第24-25页 |
| 2.4 番茄小RNA文库数据分析 | 第25-27页 |
| 2.4.1 小RNA文库的构建 | 第25页 |
| 2.4.2 晚疫病相关miRNA的靶基因分析 | 第25页 |
| 2.4.3 番茄miRNA的实时定量验证 | 第25-27页 |
| 2.5 结果 | 第27-37页 |
| 2.5.1 番茄叶片总RNA | 第27页 |
| 2.5.2 sRNA分析 | 第27-29页 |
| 2.5.3 番茄中保守miRNA鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5.4 番茄新miRNA的鉴定及靶基因预测 | 第30-34页 |
| 2.5.5 番茄miRNA的差异表达分析 | 第34-35页 |
| 2.5.6 番茄miRNA实时定量验证 | 第35页 |
| 2.5.7 番茄miRNA的靶基因预测 | 第35-37页 |
| 2.6 讨论 | 第37页 |
| 2.7 小结 | 第37-38页 |
| 3 sly-miR396的表达模式分析 | 第38-51页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料及试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.1 数据库及分析软件 | 第38页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第38页 |
| 3.2.3 实验试剂及仪器 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.3.1 sly-miR396的生物信息学分析 | 第39页 |
| 3.3.2 sly-miR396及其靶基因的表达模式分析 | 第39-41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-49页 |
| 3.4.1 sly-miR396的靶基因预测结果 | 第41页 |
| 3.4.2 sly-miR396基因的上游序列分析 | 第41-42页 |
| 3.4.3 sly-miR396的表达模式分析 | 第42-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49页 |
| 3.6 小结 | 第49-51页 |
| 4 MIR396基因的克隆及植物表达载体构建 | 第51-60页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料及试剂 | 第51页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.2.2 实验试剂及仪器 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.3.1 番茄基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| 4.3.2 MIR396基因的克隆 | 第52-55页 |
| 4.3.3 MIR396植物过表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-58页 |
| 4.4.1 番茄基因组DNA | 第56-57页 |
| 4.4.2 MIR396基因的克隆结果 | 第57页 |
| 4.4.3 MIR396植物表达载体的构建结果 | 第57-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-59页 |
| 4.6 小结 | 第59-60页 |
| 5 miR396的功能分析 | 第60-68页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第60页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.2.2 实验试剂及仪器 | 第60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.3.1 根癌农杆菌工程菌的获得 | 第60-61页 |
| 5.3.2 miR396在番茄内的瞬时表达 | 第61-62页 |
| 5.3.3 miR396在烟草内的稳定表达 | 第62页 |
| 5.3.4 烟草再生植株的分子检测 | 第62页 |
| 5.4 结果与分析 | 第62-67页 |
| 5.4.1 农杆菌工程菌的检测 | 第62-63页 |
| 5.4.2 miR396在番茄中瞬时表达情况 | 第63-64页 |
| 5.4.3 瞬时表达番茄的抗病性检测 | 第64页 |
| 5.4.4 MIR396转化烟草的检测 | 第64-66页 |
| 5.4.5 转基因烟草中miR396及其靶基因的表达分析 | 第66-67页 |
| 5.5 讨论 | 第67页 |
| 5.6 小结 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录A 培养基配方 | 第74-75页 |
| 附录B 论文中所用质粒图谱 | 第75-76页 |
| 附录C 电泳用DNA Marker | 第76-77页 |
| 附录D MIR396基因序列 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
