| 本研究的主要创新点 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-40页 |
| 1.1 枯草芽胞杆菌简介 | 第13-17页 |
| 1.1.1 枯草芽胞杆菌及其基因组 | 第13-15页 |
| 1.1.2 枯草芽胞杆菌的细胞壁 | 第15-17页 |
| 1.2 枯草芽胞杆菌的应用 | 第17-24页 |
| 1.2.1 枯草芽胞杆菌在农业中的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.2 枯草芽胞杆菌用作益生菌 | 第19-22页 |
| 1.2.3 枯草芽胞杆菌细胞工厂 | 第22-24页 |
| 1.3 枯草芽胞杆菌的产量优化 | 第24-26页 |
| 1.4 枯草芽胞杆菌自溶相关基因 | 第26-39页 |
| 1.4.1 枯草芽胞杆菌的肽聚糖水解酶及其功能 | 第27-34页 |
| 1.4.2 原噬菌体相关肽聚糖水解酶 | 第34-36页 |
| 1.4.3 自食相关基因 | 第36-39页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 第二章 枯草芽胞杆菌自溶相关基因缺失突变株的构建及其对生物量的影响 | 第40-95页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-48页 |
| 2.1.1 质粒菌株 | 第40-42页 |
| 2.1.2 药品试剂 | 第42-44页 |
| 2.1.3 主要的培养基和溶液 | 第44-47页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第47-48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-64页 |
| 2.2.1 枯草芽胞杆菌B.subtilis基因组的提取 | 第48页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第48-52页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第52-53页 |
| 2.2.4 PCR(聚合酶链式反应)扩增 | 第53-54页 |
| 2.2.5 酶切、回收、连接等DNA相关操作 | 第54页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第54-55页 |
| 2.2.7 枯草芽胞杆菌自然感受态的制备及质粒转化 | 第55页 |
| 2.2.8 枯草芽胞杆菌电转化方法 | 第55-56页 |
| 2.2.9 DNA测序及序列比对 | 第56页 |
| 2.2.10 载体的构建 | 第56-59页 |
| 2.2.11 同源重组敲除目的基因 | 第59-61页 |
| 2.2.12 枯草芽胞杆菌生物量的测定 | 第61页 |
| 2.2.13 枯草芽胞杆菌菌体形态观察 | 第61页 |
| 2.2.14 枯草芽胞杆菌芽胞计数 | 第61-62页 |
| 2.2.15 反转录PCR | 第62-63页 |
| 2.2.16 运动性检测 | 第63-64页 |
| 2.2.17 自溶活性检测 | 第64页 |
| 2.3 结果与分析 | 第64-92页 |
| 2.3.1 敲除载体的构建 | 第64-66页 |
| 2.3.2 自溶基因单缺失突变株 | 第66-75页 |
| 2.3.3 自溶酶基因的二重缺失 | 第75-78页 |
| 2.3.4 自溶酶基因的多重缺失 | 第78-81页 |
| 2.3.5 自溶基因缺失对细胞其他功能的影响 | 第81-92页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第92-95页 |
| 2.4.1 肽聚糖水解酶在细胞自溶中的角色 | 第92-93页 |
| 2.4.2 原噬菌体的作用 | 第93页 |
| 2.4.3 细胞自食因子SkfA与SdpC的作用 | 第93页 |
| 2.4.4 提高生物量抑制细胞自溶的最佳策略 | 第93-95页 |
| 第三章 枯草芽胞杆菌自溶相关基因缺失突变株的异源蛋白表达 | 第95-119页 |
| 3.1 实验材料 | 第95-97页 |
| 3.1.1 菌株质粒 | 第95-96页 |
| 3.1.2 药品试剂 | 第96页 |
| 3.1.3 主要的培养基和溶液 | 第96-97页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第97页 |
| 3.2 实验方法 | 第97-102页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第97-98页 |
| 3.2.2 β半乳糖苷酶酶活的检测 | 第98-99页 |
| 3.2.3 纳豆激酶酶活检测 | 第99-100页 |
| 3.2.4 尿激酶标准曲线的制作 | 第100页 |
| 3.2.5 载体的构建 | 第100-102页 |
| 3.3 结果与分析 | 第102-117页 |
| 3.3.1 枯草芽胞杆菌表达白细胞介素IL32 | 第102-106页 |
| 3.3.2 枯草芽胞杆菌融合表达白细胞介素IL32和绿色荧光蛋白 | 第106-110页 |
| 3.3.3 枯草芽胞杆菌表达β-半乳糖苷酶 | 第110-113页 |
| 3.3.4 枯草芽胞杆菌分泌表达纳豆激酶 | 第113-117页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第117-119页 |
| 本研究总结 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-135页 |
| 博士研究生期间所发表论文 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
