| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 甘蔗简介 | 第11页 |
| 1.2 甘蔗主要真菌性病害 | 第11-15页 |
| 1.2.1 甘蔗黑穗病 | 第12页 |
| 1.2.2 甘蔗赤腐病 | 第12-13页 |
| 1.2.3 甘蔗梢腐病 | 第13-14页 |
| 1.2.4 甘蔗黄斑病 | 第14页 |
| 1.2.5 甘蔗凤梨病 | 第14-15页 |
| 1.2.6 甘蔗褐条病 | 第15页 |
| 1.3 甘蔗转基因研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 抗虫转基因甘蔗 | 第15-16页 |
| 1.3.2 抗逆性转基因甘蔗 | 第16页 |
| 1.3.3 抗病转基因甘蔗 | 第16-17页 |
| 1.3.4 增强糖代谢转基因甘蔗 | 第17页 |
| 1.4 KP4及其相关毒素蛋白 | 第17-25页 |
| 1.4.1 Killer Protein简介 | 第17-18页 |
| 1.4.2 KP1蛋白研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.3 KP4蛋白研究进展 | 第19-23页 |
| 1.4.4 KP6蛋白研究进展 | 第23-25页 |
| 1.5 本论文研究目的,研究内容及技术路线 | 第25-27页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-45页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 质粒及菌种 | 第27页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第27页 |
| 2.2 主要培养基及常用的抗生素和激素配制 | 第27-28页 |
| 2.2.1 主要培养基的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.2 抗生素及激素的配制 | 第28页 |
| 2.3 实验仪器 | 第28页 |
| 2.4 KP4植物表达载体PAKP4的构建 | 第28-35页 |
| 2.4.1 质粒pPZP-KP4和pCAMBIA3300的大量提取和纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.2 质粒pPZP-KP4和pCAMBIA3300的酶切、连接和转化 | 第29-32页 |
| 2.4.3 重组质粒的小量提取 | 第32页 |
| 2.4.4 重组质粒pAKP4的电泳分析 | 第32页 |
| 2.4.5 重组质粒pAKP4的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4.6 重组菌pAKP4的保存 | 第33页 |
| 2.4.7 植物表达载体pAKP4转化农杆菌 | 第33-35页 |
| 2.5 KP4基因遗传转化甘蔗 | 第35-37页 |
| 2.5.1 甘蔗转化材料及农杆菌菌液的准备 | 第35-36页 |
| 2.5.2 农杆菌菌液侵染愈伤组织以及共培养 | 第36页 |
| 2.5.3 侵染后的愈伤组织分化成苗 | 第36页 |
| 2.5.4 甘蔗小植株的筛选培养 | 第36页 |
| 2.5.5 甘蔗抗性苗的炼苗 | 第36-37页 |
| 2.6 转化植株的分子检测 | 第37-42页 |
| 2.6.1 甘蔗总DNA的微量提取(CTAB法) | 第37页 |
| 2.6.2 转化植株的PCR检测 | 第37-38页 |
| 2.6.3 转化植株的Southern杂交检测 | 第38-40页 |
| 2.6.4 转基因植株的RT-PCR检测 | 第40-42页 |
| 2.7 转基因甘蔗对黑穗病的抗病性的初步鉴定 | 第42-44页 |
| 2.7.1 甘蔗黑粉菌采集及保存 | 第42页 |
| 2.7.2 甘蔗黑粉菌活性检测 | 第42页 |
| 2.7.3 转基因植株粗蛋白对甘蔗黑穗病孢子萌发的影响 | 第42-43页 |
| 2.7.4 接种、材料种植及发病调查 | 第43-44页 |
| 2.8 KP4原核表达 | 第44-45页 |
| 2.8.1 KP4原核表达载体的构建 | 第44页 |
| 2.8.2 表达形式的确定 | 第44页 |
| 2.8.3 培养温度对重组蛋白表达的影响 | 第44页 |
| 2.8.4 最佳诱导时间的选择 | 第44页 |
| 2.8.5 IPTG浓度对蛋白表达量的影响 | 第44页 |
| 2.8.6 重组蛋白纯化 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-59页 |
| 3.1 植物表达载体PAKP4的构建 | 第45-46页 |
| 3.2 植物表达载体PAKP4导入农杆菌 | 第46-47页 |
| 3.3 农杆菌介导的甘蔗转化 | 第47-50页 |
| 3.3.1 甘蔗胚性愈伤组织的诱导 | 第47-48页 |
| 3.3.2 农杆菌浸染后的愈伤组织分化成苗 | 第48页 |
| 3.3.3 甘蔗幼苗的PPT筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.4 甘蔗抗性苗的炼苗 | 第49-50页 |
| 3.4 转化植株的分子检测 | 第50-53页 |
| 3.4.1 甘蔗总DNA的小量提取 | 第50页 |
| 3.4.2 转化植株的PCR检测 | 第50-51页 |
| 3.4.3 转化植株的Southern杂交检测 | 第51-52页 |
| 3.4.4 转基因植株的RT-PCR检测 | 第52-53页 |
| 3.5 转基因株系对黑穗病的抗病性的初步鉴定 | 第53-55页 |
| 3.5.1 甘蔗黑粉菌冬孢子活性检测结果 | 第53-54页 |
| 3.5.2 转基因植株蛋白粗提液对黑穗病孢子萌发影响 | 第54页 |
| 3.5.3 转基因植株黑穗病抗性初步鉴定结果 | 第54-55页 |
| 3.6 KP4原核表达 | 第55-59页 |
| 3.6.1 KP4原核表达载体pET-KP4的构建 | 第55-56页 |
| 3.6.2 KP4蛋白的表达形式 | 第56页 |
| 3.6.3 温度对KP4表达的影响 | 第56-57页 |
| 3.6.4 不同诱导时间对重组KP4表达的影响 | 第57-58页 |
| 3.6.5 IPTG浓度对KP4蛋白表达的影响 | 第58页 |
| 3.6.6 重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 4.1 关于KP4基因 | 第59页 |
| 4.2 关于甘蔗的转化及筛选 | 第59-60页 |
| 4.3 关于甘蔗对黑穗病抗性鉴定 | 第60页 |
| 4.4 关于原核表达 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 本实验研究的后续工作 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
