| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1. 前言 | 第11-23页 |
| ·天然橡胶生产的现状 | 第11-12页 |
| ·巴西橡胶树的形态和生理 | 第12页 |
| ·植物的抗性基因 | 第12-21页 |
| ·植物金属硫蛋白(motallothionein,MT)家族的研究进展 | 第12-14页 |
| ·植物MT结构和分类 | 第13页 |
| ·植物中金属硫蛋白(MT)功能分析 | 第13-14页 |
| ·DREB转录因子家族的研究进展 | 第14-18页 |
| ·DREB转录因子的结构和分类 | 第14-15页 |
| ·DRE/CRT顺式作用元件 | 第15-16页 |
| ·DREBs在逆境胁迫中的作用机理 | 第16-18页 |
| ·钙依赖蛋白激酶(CDPKs)的研究进展 | 第18-21页 |
| ·感受逆境信号的钙信使的产生 | 第18页 |
| ·钙依赖蛋白激酶(CDPKs)的结构特性 | 第18-19页 |
| ·CDPKs在植物胁迫的信号转导中的作用 | 第19-20页 |
| ·CDPKs的生物学功能 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-45页 |
| ·材料与试剂 | 第23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·质粒及菌种 | 第23页 |
| ·生化试剂 | 第23页 |
| ·方法与步骤 | 第23-45页 |
| ·橡胶树树叶总RNA的提取方法 | 第23-24页 |
| ·准备事项 | 第23-24页 |
| ·橡胶树树叶总RNA的提取 | 第24页 |
| ·HbMT、HbDREB和HbCDPK的EST片段扩增 | 第24-28页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25页 |
| ·目的片段的回收 | 第25-26页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第26-28页 |
| ·3'RACE扩增HbMT、HbDREB和HbCDPK家族基因成员的3’端 | 第28-31页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·3'RACE cDNA模板的制备 | 第29页 |
| ·套式PCR扩增HbMT、HbDREB和HbCDPK家族成员的3’端 | 第29-30页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第30页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第30-31页 |
| ·5'RACE扩增HbMT,HbDREB和HbCDPK家族成员的5’端 | 第31-36页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·5'RACE模板的制备 | 第31-34页 |
| ·套式PCR扩增HbMT、HbDREB和HbCDPK家族成员5’端 | 第34-35页 |
| ·目的片段的胶回收 | 第35页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第35-36页 |
| ·HbMT2a、HbDREB2、HbCDPK1基因全长cDNA的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·基因全长PCR扩增反应 | 第36-37页 |
| ·目的片段的胶回收 | 第37页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第37页 |
| ·HbMT、HbDREB、HbCDPK基因家族成员的表达分析 | 第37-41页 |
| ·材料的处理 | 第37-38页 |
| ·根、茎、树皮、叶总RNA的提取 | 第38页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第38页 |
| ·半定量RT-PCR | 第38-40页 |
| ·荧光定量PCR | 第40-41页 |
| ·HbMT2a基因的原核表达 | 第41-45页 |
| ·开放阅读框的克隆及鉴定 | 第41页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·工程菌的表达 | 第42-44页 |
| ·CuSO_4和ZnSO_4对工程菌的处理 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-73页 |
| ·树叶、树皮、茎、根的总RNA的提取 | 第45页 |
| ·HbMT、HbDREB和HbCDPK家族基因的克隆 | 第45-61页 |
| ·橡胶树叶HbMT、HbDREB和HbCDPK家族的EST扩增结果 | 第45-46页 |
| ·橡胶树叶HbMT、HbDREB和HbCDPK家族成员的3’端扩增结果 | 第46-52页 |
| ·橡胶树叶HbMT、HbDREB和HbCDPK基因家族成员的5’端扩增结果 | 第52页 |
| ·橡胶树叶HbMT2a、HbDREB2和HbCDPK1的全长克隆结果 | 第52-53页 |
| ·HbMT2a、HbDREB2和HbCDPK1基因同源性和系统发育分析 | 第53-61页 |
| ·非生物因子对橡胶树叶中HbMT、HbDREB、HbCDPK基因家族成员表达的影响 | 第61-65页 |
| ·PEG对HbMT、HbDREB和HbCDPK家族成员的表达影响 | 第61-62页 |
| ·PEG、H_2O_2、ABA、Me-JA、ZnSO_4和CuSO_4对HbMT2a表达的影响 | 第62页 |
| ·PEG、H_2O_2、ABA、Me-JA、ZnSO_4和CuSO_4对HbDREB2表达的影响 | 第62-63页 |
| ·PEG、H_2O_2、ABA、Me-JA、ZnSO_4和CuSO_4对HbCDPK1表达的影响 | 第63-65页 |
| ·ABA、BA和IAA对HbMT2a、HbDREB2、HbCDPK1基因表达的影响 | 第65-67页 |
| ·ABA、BA和IAA对橡胶树树皮中HbMT2a基因表达的影响 | 第65页 |
| ·ABA、BA和IAA对橡胶树树皮中HbDREB2基因表达的影响 | 第65-66页 |
| ·ABA、BA和IAA对橡胶树树皮中HbCDPK1基因表达的影响 | 第66-67页 |
| ·HbMT2a、HbDREB2、HbCDPK1基因的组织特异性表达 | 第67页 |
| ·低温对HbMT2a、HbDREB2和HbCDPK家族成员表达的影响 | 第67-71页 |
| ·HbMT2a-His融合蛋白的原核表达 | 第71-72页 |
| ·HbMT2a的功能分析 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-78页 |
| ·HbMT2a、HbDREB2、HbCDPK1分别是HbMT、HbDREB、HbCDPK家族成员 | 第73-74页 |
| ·关于HbMT2a基因表达模式和功能的探讨 | 第74-75页 |
| ·关于HbDREB2基因的表达模式和功能的探讨 | 第75-76页 |
| ·关于HbCDPK1和HbCDPK6基因的表达模式和功能的讨论 | 第76-78页 |
| 5. 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
