| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 主要英文缩略词及符号 | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 趋化因子的概述 | 第11-12页 |
| 1.2 新型趋化因子CXCL17概述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 人和小鼠CXCL17的发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CXCL17的特性 | 第13-14页 |
| 1.2.3 CXCL17受体的发现 | 第14页 |
| 1.2.4 CXCL17功能作用 | 第14-15页 |
| 1.2.5 猪源CXCL17的研究现状及意义 | 第15-16页 |
| 1.3 IPEC-J2细胞概述 | 第16-17页 |
| 1.4 本研究的目的意义与技术路线 | 第17-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 细胞 | 第20页 |
| 2.1.4 实验动物组织 | 第20页 |
| 2.1.5 引物 | 第20-21页 |
| 2.1.6 主要试剂与配方 | 第21-23页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 质粒的抽提 | 第24-25页 |
| 2.2.3 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第25-26页 |
| 2.2.4 Trizol法提取总RNA | 第26-27页 |
| 2.2.5 c DNA第一链的合成 | 第27页 |
| 2.2.6 基因的克隆与生物信息学分析 | 第27-31页 |
| 2.2.7 原核表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.2.8 真核表达载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.9 IPEC-J2细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.2.10 转染 | 第34页 |
| 2.2.11 细菌感染IPEC-J2细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.12 大肠杆菌脂多糖（LPS）提取 | 第35页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测基因的表达 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-58页 |
| 3.1 猪CXCL17基因的克隆 | 第37-40页 |
| 3.1.1 RNA质量的检测 | 第37页 |
| 3.1.2 引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| 3.1.3 猪CXCL17基因的扩增 | 第38-39页 |
| 3.1.4 猪CXCL17基因T载体构建 | 第39-40页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第40-48页 |
| 3.2.1 猪CXCL17基因开放阅读框(ORF)寻找及组成分析 | 第40-41页 |
| 3.2.2 猪CXCL17蛋白理化性质分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 猪CXCL17蛋白的亲水性、疏水性分析 | 第42-43页 |
| 3.2.4 猪CXCL17信号肽序列预测分析 | 第43-44页 |
| 3.2.5 猪CXCL17蛋白磷酸化位点预测分析 | 第44-45页 |
| 3.2.6 猪CXCL17二级结构预测分析 | 第45-46页 |
| 3.2.7 猪CXCL17蛋白质氨基酸序列同源性分析 | 第46页 |
| 3.2.8 猪CXCL17氨基酸序列进化树构建与分析 | 第46-48页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测猪CXCL17表达方法的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.1 RT-q PCR的引物特异性鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.2 标准曲线的建立 | 第49-50页 |
| 3.4 猪CXCL17的组织分布 | 第50-51页 |
| 3.5 猪CXCL17的原核表达 | 第51-53页 |
| 3.5.1 带酶切位点引物的设计与合成 | 第51页 |
| 3.5.2 猪CXCL17成熟肽基因的扩增 | 第51-52页 |
| 3.5.3 重组原核表达质粒鉴定 | 第52-53页 |
| 3.5.4 重组原核表达载体的诱导表达 | 第53页 |
| 3.6 猪CXCL17真核表达 | 第53-55页 |
| 3.6.1 带酶切位点引物的设计与合成 | 第53页 |
| 3.6.2 猪CXCL17全长肽基因的扩增 | 第53-54页 |
| 3.6.3 重组真核表达质粒鉴定 | 第54页 |
| 3.6.4 重组真核表达质粒转染IPEC-J2细胞CXCL17的表达 | 第54-55页 |
| 3.7 不同细菌感染IPCE-J2细胞后CXCL17的表达 | 第55-56页 |
| 3.8 不同剂量LPS作用IPEC-J2细胞后CXCL17的表达 | 第56-58页 |
| 4 讨论与结论 | 第58-61页 |
| 4.1 讨论 | 第58-60页 |
| 4.2 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
