| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要符号对照表 | 第10-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 基因载体 | 第12页 |
| 1.2 腺相关病毒载体 | 第12-14页 |
| 1.3 壳聚糖研究概况 | 第14-16页 |
| 1.3.1 壳聚糖理化性质 | 第14页 |
| 1.3.2 壳聚糖的用途 | 第14-15页 |
| 1.3.3 制备壳聚糖纳米粒的方法 | 第15-16页 |
| 1.4 聚乙二醇概述 | 第16页 |
| 1.5 叶酸受体与叶酸概述 | 第16-17页 |
| 1.6 本论文选题的目的及意义 | 第17-18页 |
| 第2章 壳聚糖衍生物的合成，纯化与结构鉴定 | 第18-42页 |
| 2.1 设计思路及制备路线 | 第18页 |
| 2.2 实验部分 | 第18-25页 |
| 2.2.1 主要试剂与规格 | 第18-19页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2.3 低聚壳聚糖的纯化 | 第19-21页 |
| 2.2.4 叶酸活性酯的合成 | 第21页 |
| 2.2.5 叶酸PEG的合成及纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.6 叶酸壳聚糖的合成及纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.7 PEG壳聚糖的合成与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.8 叶酸PEG壳聚糖的合成与纯化 | 第24页 |
| 2.2.9 红外光谱（FTIR）测试 | 第24页 |
| 2.2.10 核磁共振氢谱（1H-NMR）测试 | 第24-25页 |
| 2.3 化合物纯化结果与结构鉴定 | 第25-41页 |
| 2.3.1 壳聚糖的纯化结果 | 第25-26页 |
| 2.3.2 叶酸PEG的纯化结果 | 第26-28页 |
| 2.3.3 叶酸壳聚糖的合成，纯化以及叶酸接枝率的测量。 | 第28-33页 |
| 2.3.4 PEG壳聚糖的合成与纯化结果 | 第33-36页 |
| 2.3.5 叶酸PEG壳聚糖的合成及纯化结果 | 第36-37页 |
| 2.3.6 红外图谱确定化合物结构 | 第37-39页 |
| 2.3.7 核磁共振确定化合物结构 | 第39-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 壳聚糖/r AAV纳米粒的制备 | 第42-50页 |
| 3.1 实验思路 | 第42页 |
| 3.2 实验部分 | 第42-44页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第42页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.3 溶液的配置 | 第43页 |
| 3.2.4 叶酸偶联化合物溶解性考察 | 第43页 |
| 3.2.5 壳聚糖包裹rAAV纳米粒的条件优化 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-49页 |
| 3.3.1 叶酸壳聚糖和叶酸PEG壳聚糖在不同溶液中的溶解 | 第44-45页 |
| 3.3.2 不同缓冲液中制备壳聚糖/AAV纳米粒的实验结果 | 第45页 |
| 3.3.4 不同壳聚糖溶液与TPP体积比的纳米粒制备结果。 | 第45-46页 |
| 3.3.5 病毒加入量考察结果 | 第46-48页 |
| 3.3.6 最优条件下制备壳聚糖包裹rAAV纳米粒 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第4章 壳聚糖衍生物/rAAV纳米粒对肿瘤细胞的靶向作用 | 第50-72页 |
| 4.1 实验思路 | 第50页 |
| 4.2 实验部分 | 第50-56页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第50页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第50-51页 |
| 4.2.3 细胞系 | 第51页 |
| 4.2.4 主要溶液的配置 | 第51页 |
| 4.2.5 细胞培养 | 第51-53页 |
| 4.2.6 不同叶酸含量纳米粒的制备 | 第53-54页 |
| 4.2.7 测病毒基因组滴度 | 第54页 |
| 4.2.8 细胞转染 | 第54-55页 |
| 4.2.9 病毒转染细胞的滴度 | 第55页 |
| 4.2.10 不同时间点转染纳米粒荧光表达量 | 第55页 |
| 4.2.11 饱和叶酸受体 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结论 | 第56-70页 |
| 4.3.1 实时定量PCR（Q-PCR）的实验结果 | 第56-57页 |
| 4.3.2 rAAV转染细胞滴度的确定 | 第57-58页 |
| 4.3.3 壳聚糖/rAAV纳米粒初步转染效率 | 第58-62页 |
| 4.3.4 各纳米粒转染细胞的荧光图片 | 第62-64页 |
| 4.3.5 各纳米粒对KB细胞和A549细胞的靶向性 | 第64-67页 |
| 4.3.6 叶酸壳聚糖纳米粒与叶酸PEG壳聚糖纳米粒对rAAV的保护作用 | 第67-68页 |
| 4.3.7 叶酸壳聚糖/rAAV与叶酸PEG壳聚糖/rAAV纳米粒对比 | 第68页 |
| 4.3.8 饱和叶酸受体实验结果 | 第68-69页 |
| 4.3.9 讨论 | 第69-70页 |
| 4.4 本章小结 | 第70-72页 |
| 第5章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 总结 | 第72页 |
| 5.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 个人简历 | 第79页 |
