| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第11页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白 | 第11-17页 |
| 1.2.1 营养期杀虫蛋白的分类 | 第12-14页 |
| 1.2.2 营养期杀虫蛋白的杀虫活性及作用机理 | 第14-17页 |
| 1.3 营养期杀虫蛋白的应用 | 第17-18页 |
| 1.3.1 构建工程菌 | 第17-18页 |
| 1.3.2 构建转基因植物 | 第18页 |
| 1.4 Bt蛋白质的改造 | 第18-20页 |
| 1.4.1 定点突变 | 第18-19页 |
| 1.4.2 结构域互换 | 第19页 |
| 1.4.3 随机诱变 | 第19页 |
| 1.4.4 DNA改组 | 第19-20页 |
| 1.5 三种重要鳞翅目害虫及其危害 | 第20-22页 |
| 1.5.1 甜菜夜蛾 | 第20页 |
| 1.5.2 棉铃虫 | 第20-21页 |
| 1.5.3 小地老虎 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的立题依据和目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.3 供试昆虫 | 第25页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 突变方法 | 第25-26页 |
| 2.2.2 PCR扩增引物序列 | 第26-27页 |
| 2.2.3 PCR反应体系 | 第27-28页 |
| 2.2.4 消化甲基化模板 | 第28页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.2.6 BL21感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.7 热击转化BL21感受态细胞 | 第28页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.9 序列测定及分析 | 第29页 |
| 2.2.10 蛋白的表达与提取 | 第29页 |
| 2.2.11 SDS-蛋白电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.12 蛋白定量的方法 | 第30页 |
| 2.2.13 生物活性测定 | 第30页 |
| 2.2.14 生测数据分析 | 第30页 |
| 2.2.15 胰蛋白酶消化实验 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-41页 |
| 3.1 含vip3Aa11基因片段的表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.2 突变基因的克隆 | 第32-34页 |
| 3.3 Vip3Aa11与突变体蛋白的表达与分析 | 第34-35页 |
| 3.4 杀虫活性测定 | 第35-40页 |
| 3.4.1 初筛 | 第35-39页 |
| 3.4.2 复筛 | 第39-40页 |
| 3.5 Vip3Aa11及突变体蛋白对胰蛋白酶的敏感性分析 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |