| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-12页 |
| 1 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 油桐生物学特性简介 | 第13页 |
| 1.1.2 油桐资源在中国的分布 | 第13-15页 |
| 1.1.3 油桐的经济价值与产业发展 | 第15-16页 |
| 1.2 油桐在分子水平上的研究 | 第16-18页 |
| 1.2.1 油桐分子标记的研究进展 | 第16页 |
| 1.2.2 油桐cDNA文库和EST文库构建 | 第16-17页 |
| 1.2.3 其它分子水平的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 KASⅡ基因概述 | 第18-23页 |
| 1.3.1 植物脂肪酸的合成 | 第18-20页 |
| 1.3.2 脂肪酸的积累模式 | 第20-21页 |
| 1.3.3 KASⅡ基因 | 第21-22页 |
| 1.3.4 KASⅡ基因在其他代谢途径中的作用 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.5 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 油桐KASⅡ基因的克隆与分析 | 第25-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料来源 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂与药品 | 第25页 |
| 2.1.3 软件与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 配制溶液 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 油桐种子中RNA的提取与检测 | 第27-28页 |
| 2.2.2 mRNA的反转录 | 第28-29页 |
| 2.2.3 油桐KASⅡ基因的简并PCR | 第29-30页 |
| 2.2.4 3'RACE | 第30-32页 |
| 2.2.5 3'RACE PCR扩增 | 第32页 |
| 2.2.6 5'RACE | 第32-33页 |
| 2.2.7 KASⅡ基因全长克隆 | 第33-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-43页 |
| 2.3.1 油桐种子中RNA提取 | 第35页 |
| 2.3.2 同源片段的简并RCR扩增与RACE扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.3 全长序列分析 | 第36-38页 |
| 2.3.4 核酸序列分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 蛋白质序列分析 | 第39-42页 |
| 2.3.6 TA克隆结果分析 | 第42-43页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第43-45页 |
| 2.4.1 结论 | 第43-44页 |
| 2.4.2 讨论 | 第44-45页 |
| 3 KASⅡ基因的sourthern blot检测 | 第45-52页 |
| 3.1 实验内容 | 第45-48页 |
| 3.1.1 油桐种子基因组DNA提取 | 第45页 |
| 3.1.2 探针PCR扩增与探针制备 | 第45-46页 |
| 3.1.3 基因组DNA酶切 | 第46页 |
| 3.1.4 Southern blot检测 | 第46-48页 |
| 3.2 实验结果 | 第48-50页 |
| 3.2.1 油桐种子基因组DNA提取结果 | 第48-49页 |
| 3.2.2 探针PCR扩增与效率检测结果 | 第49页 |
| 3.2.3 基因组单酶切结果 | 第49-50页 |
| 3.2.4 Southern杂交检测 | 第50页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第50-52页 |
| 4 KASⅡ基因的原核表达 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2 实验内容 | 第53-55页 |
| 4.2.1 获取带酶切位点的目的片段 | 第53页 |
| 4.2.2 提取表达载体 | 第53页 |
| 4.2.3 表达载体与目的片段连接 | 第53-54页 |
| 4.2.4 融合蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-58页 |
| 4.3.1 获取重组表达载体 | 第55-56页 |
| 4.3.2 重组质粒KASⅡ/pGEX-4T-1转化阳性结果鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.3 IPTG诱导表达结果分析 | 第57-58页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 5 KASⅡ表达蛋白可溶性分析与初步纯化 | 第60-63页 |
| 5.1 KASⅡ表达蛋白可溶性分析 | 第60页 |
| 5.2 KASⅡ目的蛋白的初步纯化 | 第60-61页 |
| 5.2.1 菌体裂解 | 第60页 |
| 5.2.2 包涵体洗涤与纯化 | 第60页 |
| 5.2.3 纯化结果SDS-PAGE电泳检验 | 第60-61页 |
| 5.3 实验结果 | 第61-62页 |
| 5.3.1 表达蛋白可溶性分析 | 第61页 |
| 5.3.2 目的蛋白的初步纯化 | 第61-62页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第62-63页 |
| 6 问题与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
