| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-11页 |
| 第一部分 文献综述 二代测序技术在抗体发现以及疾病诊断中的应用 | 第11-22页 |
| 1 抗体以及骆驼纳米抗体 | 第11-12页 |
| 2 抗体库以及高通量测序 | 第12-13页 |
| 3 NGS测序技术在抗体发现和疾病鉴定中的应用 | 第13-16页 |
| 3.1 NGS测序技术在抗体制备中的应用 | 第13-14页 |
| 3.2 NGS测序技术在感染性疾病研究中的应用 | 第14-15页 |
| 3.3 NGS测序技术在免疫失调疾病检测中的应用 | 第15-16页 |
| 3.4 NGS测序技术在癌症诊断中的应用 | 第16页 |
| 4 展望 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-22页 |
| 第二部分 实验研究 | 第22-66页 |
| 第一章 骆驼免疫抗体库高通量测序分析 | 第22-42页 |
| 1 实验材料 | 第24页 |
| 1.1 实验动物 | 第24页 |
| 1.2 菌种及质粒 | 第24页 |
| 1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 1.4 实验引物 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.1 抗原FSHR的大量诱导表达以及纯化 | 第24-25页 |
| 2.2 新疆双峰驼的抗原免疫 | 第25页 |
| 2.3 新疆双峰驼全血中外周血淋巴细胞的分离 | 第25-26页 |
| 2.4 间接ELISA检测骆驼血清中抗FSHR抗体滴度 | 第26页 |
| 2.5 骆驼外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.6 反转录cDNA的合成 | 第27页 |
| 2.7 巢式PCR扩增VHH基因片段 | 第27-28页 |
| 2.8 VHH序列的NGS测序以及序列分析 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-37页 |
| 3.1 纳米抗体制备及鉴定策略 | 第29-30页 |
| 3.2 抗原FSHR的大量诱导及纯化 | 第30页 |
| 3.3 抗原FSHR对新疆双峰驼的免疫 | 第30-31页 |
| 3.4 骆驼外周血淋巴细胞RNA的提取以及VHH片段的获得 | 第31-33页 |
| 3.5 抗体库的NGS测序以及序列分析 | 第33-37页 |
| 4 讨论 | 第37-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 第二章 抗FSHR骆驼纳米抗体的制备以及性质鉴定 | 第42-66页 |
| 1 实验材料 | 第44-46页 |
| 1.1 实验质粒 | 第44页 |
| 1.2 实验抗体 | 第44页 |
| 1.3 培养基及溶液配制 | 第44-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-51页 |
| 2.1 抗体蛋白的小量蛋白诱导 | 第46页 |
| 2.2 抗体蛋白的中量诱导 | 第46-47页 |
| 2.3 抗体蛋白的纯化 | 第47页 |
| 2.4 间接ELISA检测纳米抗体对抗原FSHR的特异性 | 第47-48页 |
| 2.5 间接ELISA检测纳米抗体对抗原FSHR的结合能力 | 第48页 |
| 2.6 Western Blot检测抗体S_6和S_9与抗原FSHR的结合能力 | 第48-49页 |
| 2.7 RT-PCR检测fshr基因阳性表达的细胞 | 第49-51页 |
| 2.7.1 细胞的复苏与传代 | 第49页 |
| 2.7.2 细胞总RNA的提取 | 第49页 |
| 2.7.3 逆转录PCR | 第49-51页 |
| 2.8 细胞免疫化学方法验证纳米抗体与Caov-3 细胞的结合能力 | 第51页 |
| 3 实验结果 | 第51-60页 |
| 3.1 高通量测序分析得到的抗体蛋白的诱导表达以及纯化 | 第51-55页 |
| 3.2 间接ELISA法检测高通量测序得到的抗体对FSHR的特异性和结合力 | 第55-57页 |
| 3.3 Western blot检测S_6、S_9抗体与抗原FSHR的结合能力 | 第57-58页 |
| 3.4 细胞免疫化学方法验证S_6、S_9抗体对真核细胞的结合能力 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 小结 | 第66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
| 参与课题及发表文章 | 第68-69页 |
| 参与课题 | 第68页 |
| 发表文章 | 第68-69页 |
