| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 研究背景 | 第17-18页 |
| 1.2 5-羟甲基糠醛氧化酶 | 第18-22页 |
| 1.2.1 5-羟甲基糠醛氧化酶的发现 | 第18-19页 |
| 1.2.2 5-羟甲基糠醛氧化酶的特性 | 第19-21页 |
| 1.2.3 5-羟甲基糠醛氧化酶的催化机制 | 第21页 |
| 1.2.4 5-羟甲基糠醛氧化酶的发展前景 | 第21-22页 |
| 1.3 类弹性蛋白 | 第22-26页 |
| 1.3.1 类弹性蛋白的特性 | 第22-23页 |
| 1.3.2 类弹性蛋白的相变机制 | 第23-24页 |
| 1.3.3 类弹性蛋白的应用 | 第24-26页 |
| 1.4 过氧化氢酶 | 第26-27页 |
| 1.4.1 过氧化氢酶的结构与功能 | 第26-27页 |
| 1.4.2 过氧化氢催化机制 | 第27页 |
| 1.4.3 过氧化氢酶的应用 | 第27页 |
| 1.5 课题内容及意义 | 第27-29页 |
| 第二章 融合蛋白的载体构建 | 第29-49页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 材料及来源 | 第29页 |
| 2.2.2 仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第30-32页 |
| 2.2.4 主要溶液配制 | 第32页 |
| 2.2.5 实验引物设计 | 第32-33页 |
| 2.3 5-羟甲基糠醛氧化酶基因片段的设计合成 | 第33页 |
| 2.4 pET28a-HMFO载体构建 | 第33-39页 |
| 2.4.1 质粒的提取 | 第34-35页 |
| 2.4.2 目的片段与载体的获得 | 第35-37页 |
| 2.4.3 pET28a载体与HMFO片段连接 | 第37页 |
| 2.4.4 DH5α/BL21感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.4.5 转化 | 第37-38页 |
| 2.4.6 筛选阳性重组子 | 第38-39页 |
| 2.5 pET28a-HMFO-ELP_n载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.5.1 质粒的提取 | 第39-40页 |
| 2.5.2 目的片段及载体双酶切 | 第40页 |
| 2.5.3 连接及转化 | 第40页 |
| 2.5.4 阳性克隆子的鉴定 | 第40页 |
| 2.6 HMFO-pET28a-SUMO载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.6.1 pET28a-HMFO-SUMO载体的酶切、连接及转化 | 第41页 |
| 2.6.2 阳性克隆子的鉴定 | 第41页 |
| 2.7 pET28a-CAT-ELP_6载体的构建 | 第41-43页 |
| 2.7.1 pET28a-CAT-ELP_6载体的酶切、连接及转化 | 第42页 |
| 2.7.2 pET28a-CAT-ELP_6载体的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.8 结果与分析 | 第43-47页 |
| 2.8.1 pET28a-HMFO载体构建结果 | 第43-44页 |
| 2.8.2 pET28a-HMFO-ELP_n载体构建结果 | 第44页 |
| 2.8.3 pET28a-HMFO-SUMO载体构建结果 | 第44-46页 |
| 2.8.4 pET28a-CAT-ELP_6载体构建结果 | 第46-47页 |
| 2.9 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 酶的表达纯化 | 第49-63页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 材料及试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.1 质粒及菌体 | 第49页 |
| 3.2.2 常用溶液配制 | 第49-50页 |
| 3.3 HMFO的表达 | 第50-52页 |
| 3.4 HMFO-ELP_n的表达及纯化 | 第52-53页 |
| 3.4.1 HMFO-ELP_n的表达优化 | 第52页 |
| 3.4.2 HMFO-ELP_n的表达及纯化 | 第52-53页 |
| 3.5 HMFO-SUMO的表达及纯化 | 第53-54页 |
| 3.6 HMFO的纯化 | 第54页 |
| 3.7 CAT-ELP_6的表达及纯化 | 第54-55页 |
| 3.8 结果与分析 | 第55-61页 |
| 3.8.1 HMFO蛋白的表达 | 第55页 |
| 3.8.2 HMFO-ELP_6融合蛋白的表达及纯化 | 第55-57页 |
| 3.8.3 HMFO-ELP_6融合蛋白的表达优化 | 第57-58页 |
| 3.8.4 HMFO-ELP_(10)融合蛋白的表达及纯化 | 第58-59页 |
| 3.8.5 HMFO-SUMO融合蛋白的表达及纯化 | 第59-60页 |
| 3.8.6 HMFO蛋白的纯化 | 第60页 |
| 3.8.7 CAT-ELP_6融合蛋白的表达及纯化 | 第60-61页 |
| 3.9 本章总结 | 第61-63页 |
| 第四章 结构表征与酶活测定 | 第63-81页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第63页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第63-64页 |
| 4.3 蛋白浓度测定 | 第64页 |
| 4.4 酶的溶解度测定 | 第64页 |
| 4.5 圆二色光谱 | 第64-65页 |
| 4.6 单酶体系酶活性测定 | 第65-67页 |
| 4.6.1 液相色谱法测定酶活 | 第65-66页 |
| 4.6.2 酶催化过程温度和pH的影响 | 第66-67页 |
| 4.6.3 各产物收率及底物转化率测定 | 第67页 |
| 4.7 双酶体系酶活性测定 | 第67-68页 |
| 4.8 试验结果与分析 | 第68-79页 |
| 4.8.1 酶的溶解度测定 | 第68-70页 |
| 4.8.2 蛋白二级结构的圆二色谱分析 | 第70-73页 |
| 4.8.3 反应温度和反应液pH值对催化反应的影响 | 第73-74页 |
| 4.8.4 单酶催化反应 | 第74-76页 |
| 4.8.5 CAT-HMFO双酶体系催化反应 | 第76-79页 |
| 4.9 本章小结 | 第79-81页 |
| 第五章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 5.1 结论 | 第81-82页 |
| 5.2 展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第89-91页 |
| 作者及导师简介 | 第91-93页 |
| 附录 | 第93-94页 |
