| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-41页 |
| 第一章 雄性生殖干细胞增殖与分化的研究进展 | 第15-23页 |
| 1.1 精原干细胞 | 第15-17页 |
| 1.2 调控精原干细胞命运的转录因子 | 第17-19页 |
| 1.3 调控精原干细胞自我更新与分化的信号通路 | 第19-23页 |
| 1.3.1 Janus激酶/信号转导子和转录激活子信号通路（JAK/STAT） | 第19-20页 |
| 1.3.2 Src信号通路 | 第20页 |
| 1.3.3 磷酸肌醇 3-激酶（PI3K）/AKT通路 | 第20页 |
| 1.3.4 Ras/Erk1/2 信号通路 | 第20-21页 |
| 1.3.5 Smad信号通路 | 第21-23页 |
| 第二章 表观遗传调控的研究进展 | 第23-31页 |
| 2.1 表观遗传学的定义 | 第23-24页 |
| 2.2 DNA甲基化与基因表达调控 | 第24页 |
| 2.3 组蛋白修饰与基因表达调控 | 第24-31页 |
| 2.3.1 H3K9甲基转移酶及其介导的基因沉默 | 第25-27页 |
| 2.3.2 H3K27甲基转移酶及其介导的基因沉默 | 第27-29页 |
| 2.3.3 H4K20甲基转移酶及其介导的基因沉默 | 第29页 |
| 2.3.4 组蛋白乙酰化与基因转录调控 | 第29-31页 |
| 第三章 精子发生过程的表观修饰研究进展 | 第31-34页 |
| 3.1 DNA甲基化与表观遗传重编程 | 第31页 |
| 3.2 基因印记 | 第31-32页 |
| 3.3 组蛋白修饰 | 第32-33页 |
| 3.4 核蛋白转换 | 第33-34页 |
| 第四章 SETDB1研究进展 | 第34-41页 |
| 4.1 SETDB1的结构特点 | 第34-35页 |
| 4.2 SETDB1在早期发育中的功能 | 第35-36页 |
| 4.3 SETDB1在胚胎干细胞中的功能 | 第36-38页 |
| 4.4 SETDB1在染色质重塑及体细胞重编程中的功能 | 第38-39页 |
| 4.5 SETDB1在其他方面的功能 | 第39-40页 |
| 4.6 本研究的目的意义 | 第40-41页 |
| 第二部分 试验研究 | 第41-96页 |
| 第五章 Setdb1干扰诱导小鼠精原干细胞凋亡 | 第41-53页 |
| 5.1 材料和方法 | 第41-46页 |
| 5.1.1 细胞系 | 第41页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第41页 |
| 5.1.3 主要试剂和配制 | 第41-42页 |
| 5.1.4 si RNA转染C18-4 细胞系 | 第42页 |
| 5.1.5 线粒体膜电位的检测 | 第42-43页 |
| 5.1.6 Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞仪检测 | 第43页 |
| 5.1.7 TUNEL凋亡检测 | 第43页 |
| 5.1.8 细胞活力检测 | 第43页 |
| 5.1.9 蛋白提取及Western blot检测 | 第43-45页 |
| 5.1.10 RNA提取及RT-PCR检测 | 第45-46页 |
| 5.2 结果 | 第46-52页 |
| 5.2.1 C18-4 细胞的鉴定 | 第46-47页 |
| 5.2.2 Setdb1干扰效率检测 | 第47-48页 |
| 5.2.3 Setdb1-KD引起细胞凋亡的表型分析 | 第48页 |
| 5.2.4 Setdb1-KD引起早期细胞凋亡的检测 | 第48-50页 |
| 5.2.5 Setdb1-KD引起晚期细胞凋亡的TUNEL检测 | 第50-51页 |
| 5.2.6 Setdb1-KD诱导凋亡相关基因及蛋白表达的分析 | 第51-52页 |
| 5.3 讨论 | 第52页 |
| 5.4 小结 | 第52-53页 |
| 第六章 PTEN/AKT/FOXO1通路参与Setdb1-KD诱导的小鼠精原干细胞凋亡 | 第53-60页 |
| 6.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 6.1.1 主要仪器设备 | 第53页 |
| 6.1.2 抗体及试剂 | 第53-54页 |
| 6.1.3 si RNA转染C18-4 细胞系 | 第54页 |
| 6.1.4 TUNEL凋亡检测 | 第54页 |
| 6.1.5 细胞活力检测 | 第54页 |
| 6.1.6 蛋白提取及Western blot检测 | 第54页 |
| 6.1.7 RNA提取及RT-PCR检测 | 第54-55页 |
| 6.2 结果 | 第55-58页 |
| 6.2.1 Setdb1-KD正调控PTEN/AKT/FOXO1通路 | 第55-56页 |
| 6.2.2 Pten干扰效率检测 | 第56页 |
| 6.2.3 PTEN干扰挽救了Setdb1-KD诱导的细胞凋亡的表型分析 | 第56-57页 |
| 6.2.4 Pten与Setdb1共转染后凋亡相关基因表达的检测 | 第57-58页 |
| 6.3 讨论 | 第58-59页 |
| 6.4 小结 | 第59-60页 |
| 第七章 SETDB1协同AKT表观调控小鼠精原干细胞存活 | 第60-73页 |
| 7.1 材料与方法 | 第60-65页 |
| 7.1.1 质粒和菌株 | 第60页 |
| 7.1.2 主要仪器设备 | 第60页 |
| 7.1.3 主要试剂 | 第60-61页 |
| 7.1.4 Setdb1和Akt载体的构建 | 第61-62页 |
| 7.1.5 Western blot | 第62页 |
| 7.1.6 细胞的免疫荧光 | 第62-63页 |
| 7.1.7 SETDB1与AKT互作 | 第63页 |
| 7.1.8 荧光素酶报告实验（Luciferase reporter assay） | 第63-64页 |
| 7.1.9 染色质免疫共沉淀（Ch IP）试验 | 第64-65页 |
| 7.1.10 RT-PCR | 第65页 |
| 7.2 结果 | 第65-70页 |
| 7.2.1 相关载体的构建 | 第65-66页 |
| 7.2.2 SETDB1与AKT互作 | 第66-67页 |
| 7.2.3 SETDB1协同AKT调控FOXO1活性 | 第67-68页 |
| 7.2.4 Setdb1-KD导致FOXO1细胞核定位分析 | 第68-69页 |
| 7.2.5 FOXO1调控Bim和Puma的表达 | 第69页 |
| 7.2.6 Setdb1-KD通过H3K9甲基转移酶活性调控SSCs凋亡 | 第69-70页 |
| 7.3 讨论 | 第70-72页 |
| 7.4 小结 | 第72-73页 |
| 第八章 SETDB1在猪睾丸发育中的时序表达与定位 | 第73-82页 |
| 8.1 材料和方法 | 第73-77页 |
| 8.1.1 实验样品 | 第73页 |
| 8.1.2 主要仪器设备 | 第73页 |
| 8.1.3 主要试剂和配制 | 第73-74页 |
| 8.1.4 猪睾丸组织的样品制备、RNA及蛋白提取 | 第74-75页 |
| 8.1.5 Real time RT-PCR检测及Western blot检测 | 第75-76页 |
| 8.1.6 免疫组织化学染色 | 第76页 |
| 8.1.7 组织免疫荧光染色 | 第76-77页 |
| 8.2 结果 | 第77-80页 |
| 8.2.1 SETDB1和H3K9me3在猪睾丸发育中的表达 | 第77-78页 |
| 8.2.2 SETDB1和H3K9me3在猪睾丸中的表达分布 | 第78-79页 |
| 8.2.3 SETDB1及H3K9me3在猪性原细胞/精原干细胞的定位 | 第79页 |
| 8.2.4 SETDB1及H3K9me3在成年猪睾丸精原干细胞及精原细胞中的表达分布 | 第79-80页 |
| 8.3 讨论 | 第80-81页 |
| 8.4 小结 | 第81-82页 |
| 第九章 SETDB1在猪性原细胞中的功能 | 第82-96页 |
| 9.1 材料与方法 | 第82-87页 |
| 9.1.1 质粒和菌株 | 第82页 |
| 9.1.2 主要仪器设备 | 第82页 |
| 9.1.3 主要试剂 | 第82-83页 |
| 9.1.4 SETDB1和EZH2载体的构建 | 第83-84页 |
| 9.1.5 RT-PCR | 第84页 |
| 9.1.6 Western blot | 第84页 |
| 9.1.7 睾丸组织的消化及性原细胞富集 | 第84-85页 |
| 9.1.8 si RNA转染性原细胞 | 第85页 |
| 9.1.9 细胞的免疫荧光 | 第85-86页 |
| 9.1.10 TUNEL凋亡检测 | 第86页 |
| 9.1.11 SETDB1与EZH2互作 | 第86-87页 |
| 9.2 结果 | 第87-94页 |
| 9.2.1 p Bi FC155SETDB12001和p Bi FC173EZH2载体的构建 | 第87页 |
| 9.2.2 猪性原细胞及支持细胞的消化及富集 | 第87-88页 |
| 9.2.3 SETDB1在猪支持细胞和性原细胞中的表达水平 | 第88-89页 |
| 9.2.4 SETDB1在猪性原细胞中的功能研究 | 第89-90页 |
| 9.2.5 SETDB1-KD引起猪性原细胞发生凋亡 | 第90-92页 |
| 9.2.6 SETDB1-KD对猪支持细胞无影响 | 第92-93页 |
| 9.2.7 SETDB1与EZH2相互作用 | 第93-94页 |
| 9.3 讨论 | 第94-95页 |
| 9.4 小结 | 第95-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 本研究创新点 | 第97页 |
| 后续研究工作 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
