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大豆GmTOC1s和GmLCLs的基因克隆、表达模式及功能分析

摘要第1-5页
Abstract第5-13页
1 引言第13-30页
   ·光周期途径第13-14页
   ·光受体第14-15页
   ·光受体信号向生物钟的传递第15-17页
   ·生物钟第17-25页
     ·生物钟基因TOC1研究进展第18-21页
     ·生物钟基因LHY/CCA1研究进展第21-23页
     ·生物钟其他基因第23-25页
   ·下游调节基因第25-28页
     ·CAB2(CHLOROPYLL A/B BINDING PROTEIN 2)基因第25-26页
     ·GI(GIGANTEA)基因第26-27页
     ·CO(CONSTANS)与FT(FLOWERING LOCUST)基因第27-28页
   ·本课题研究的目的和意义第28-30页
2 材料与方法第30-49页
   ·实验材料第30-33页
     ·拟南芥材料第30页
     ·大豆材料第30页
     ·菌株及载体第30-31页
     ·主要的分子生物学试剂和实验仪器第31页
     ·常用溶液的配制第31-33页
   ·实验方法第33-49页
     ·植物材料的种植和培养第33-34页
     ·候选基因的确定第34页
     ·引物设计与PCR扩增第34页
     ·基因的染色体定位第34页
     ·系统进化树的构建第34页
     ·基因内含子/外显子结构分析第34-35页
     ·启动子作用元件分析第35页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第35-36页
     ·PCR产物的回收与连接反应第36页
     ·连接产物的转化第36-37页
     ·基因表达载体的构建第37页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第37页
     ·农杆菌转化第37-38页
     ·农杆菌克隆的鉴定第38页
     ·拟南芥转化与筛选第38页
     ·原生质体分离与瞬时表达观察亚细胞定位第38-39页
     ·总RNA提取与DNA消化第39-40页
     ·RNA变性琼脂糖凝胶电泳第40-41页
     ·cDNA第一链的合成第41页
     ·qRT-PCR引物设计第41页
     ·实时定量RT-PCR第41-42页
     ·实时定量RT-PCR表达分析第42页
     ·融合蛋白的表达纯化和抗体制备第42-44页
     ·植物总蛋白的提取第44页
     ·SDS-PAGE蛋白电泳第44-49页
3 结果与分析第49-82页
   ·大豆GmTOC1s基因的克隆及生物信息学分析第49-60页
     ·大豆GmTOC1s基因的查询与确定第49页
     ·大豆GmTOC1s基因的克隆第49-50页
     ·大豆GmTOC1s基因的染色体定位第50-51页
     ·大豆GmTOC1s基因的结构第51-52页
     ·大豆GmTOC1s基因保守位点分析第52-53页
     ·大豆GmTOC1s基因同源性分析第53-54页
     ·TOC1s系统进化树分析第54-56页
     ·大豆GmTOC1s基因启动子克隆第56页
     ·大豆GmTOC1s基因启动子分析第56-60页
   ·大豆GmLCLs基因的克隆、表达模式及功能分析第60-82页
     ·大豆GmLCLs基因的查询与确定第61页
     ·大豆GmLCLs基因的克隆第61-62页
     ·大豆GmLCLs基因的染色体定位第62-63页
     ·大豆GmLCLs基因的结构第63页
     ·大豆GmLCLs基因的保守位点分析第63-64页
     ·LCLs的系统进化树分析第64-65页
     ·LCLs邻近基因的同线性分析第65页
     ·大豆GmLCLs蛋白的亚细胞定位第65-66页
     ·大豆GmLCLs基因的表达模式第66-71页
     ·大豆GmLCLs蛋白的表达模式第71-79页
     ·大豆GmLCL1和GmLCL2基因过表达拟南芥的表现型分析第79-80页
     ·生物钟调节基因的测定第80-82页
4 讨论第82-87页
   ·大豆GmTOC1s基因的进化分析第82-83页
   ·大豆GmTOC1s启动子元件分析第83-84页
   ·大豆GmLCLs基因的进化分析第84-85页
   ·GmLCLs基因表达模式第85-86页
   ·受生物钟调节基因的测定第86-87页
5 全文结论第87-88页
致谢第88-89页
参考文献第89-102页
附录第102-121页
作者简介第121-122页

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