| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-21页 |
| 研究现状、成果 | 第15-19页 |
| 研究目的、方法 | 第19-21页 |
| 一、miR-346上调hTERT的表达不依赖AGO2 | 第21-41页 |
| 1.1 材料和方法 | 第21-33页 |
| 1.1.1 细胞系 | 第21页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.1.3 细胞培养相关试剂 | 第22页 |
| 1.1.4 分子生物学相关试剂 | 第22-24页 |
| 1.1.5 寡核苷酸 | 第24-26页 |
| 1.1.6 细胞转染 | 第26-27页 |
| 1.1.7 放线菌素D处理和RNA提取与纯化 | 第27-28页 |
| 1.1.8 逆转录制备cDNA | 第28-29页 |
| 1.1.9 mi RNA和mRNA的定量PCR检测 | 第29-30页 |
| 1.1.10 RNA免疫沉淀 (RIP) 实验结合定量PCR检测AGO2复合体中RNA的水平 | 第30-31页 |
| 1.1.11 AGO2和hTERT蛋白的western blot检测 | 第31-33页 |
| 1.1.12 统计学分析 | 第33页 |
| 1.2 结果 | 第33-37页 |
| 1.2.1 mi R-346增强h TERT mRNA的稳定性 | 第33-35页 |
| 1.2.2 mi R-346上调hTERT的表达不依赖AGO2蛋白 | 第35-37页 |
| 1.3 讨论 | 第37-39页 |
| 1.4 小结 | 第39-41页 |
| 二、miR-346的“CCGCAU”模序在上调hTERT表达过程中起关键作用 | 第41-59页 |
| 2.1 材料和方法 | 第41-47页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第41页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第41页 |
| 2.1.3 细胞培养相关试剂 | 第41页 |
| 2.1.4 分子生物学相关试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.5 模序突变型mi R-346过表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 2.1.6 荧光报告载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.1.7 细胞转染 | 第46页 |
| 2.1.8 RNA的提取和纯化 | 第46页 |
| 2.1.9 逆转录制备cDNA | 第46页 |
| 2.1.10 miRNA和mRNA的定量PCR检测 | 第46页 |
| 2.1.11蛋白的western blot检测 | 第46-47页 |
| 2.1.12 MTT实验 | 第47页 |
| 2.1.13 平板克隆形成实验 | 第47页 |
| 2.1.14 统计学分析 | 第47页 |
| 2.2 结果 | 第47-55页 |
| 2.2.1 miR-346的“CCGCAU”模序介导hTERT上调表达并促进细胞生长 | 第47-50页 |
| 2.2.2 模序突变型miR-138对hTERT的调控 | 第50-51页 |
| 2.2.3 野生型和模序突变型miR-346对ACVR2B和SMAD3的调控 | 第51-55页 |
| 2.3 讨论 | 第55-58页 |
| 2.4 小结 | 第58-59页 |
| 三、GRSF1结合miR-346的“CCGCAU”模序介导miR-346/hTERT mRNA复合体募集到核糖体促进其翻译 | 第59-77页 |
| 3.1 材料和方法 | 第59-62页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第59页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第59页 |
| 3.1.3 细胞培养相关试剂 | 第59页 |
| 3.1.4 分子生物学相关试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.5 GRSF1过表达和敲降载体的构建 | 第60页 |
| 3.1.6 细胞转染 | 第60页 |
| 3.1.7 RNA IP | 第60页 |
| 3.1.8 逆转录制备c DNA | 第60-61页 |
| 3.1.9 miRNA和mRNA的定量PCR检测 | 第61页 |
| 3.1.10 Western blot检测基因的表达 | 第61页 |
| 3.1.11 RNA EMSA | 第61页 |
| 3.1.12 蔗糖密度梯度离心实验提取核糖体中的RNA | 第61页 |
| 3.1.13 统计学分析 | 第61-62页 |
| 3.2 结果 | 第62-72页 |
| 3.2.1 GRSF1依赖mi R-346的“CCGCAU”模序介导miR-346上调hTERT的表达 | 第62-63页 |
| 3.2.2 GRSF1依赖miR-346的“CCGCAU”模序介导miR-346上调其它靶基因的表达 | 第63-65页 |
| 3.2.3 GRSF1依赖mi R-346的“CCGCAU”模序与野生型mi R-346和mi R-346/h TERT mRNA复合体相互作用 | 第65-69页 |
| 3.2.4 GRSF1依赖mi R-346的“CCGCAU”模序介导miR-346/h TERT m RNA募集到核糖体促进其翻译 | 第69-72页 |
| 3.3 讨论 | 第72-76页 |
| 3.4 小结 | 第76-77页 |
| 全文结论 | 第77-80页 |
| 论文创新点 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第92-93页 |
| 综述 | 第93-113页 |
| 参考文献 | 第105-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
