| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 巴氏杆菌病的病原学 | 第12-13页 |
| 1.1.1 多杀性巴氏杆菌的概述 | 第12页 |
| 1.1.2 多杀性巴氏杆菌的病原特征 | 第12-13页 |
| 1.1.3 多杀性巴氏杆菌的血清型 | 第13页 |
| 1.2 多杀性巴氏杆菌病流行现状 | 第13页 |
| 1.3 多杀性巴氏杆菌病诊断与检测方法 | 第13-14页 |
| 1.4 多杀性巴氏杆菌病的防治 | 第14页 |
| 1.5 多杀性巴氏杆菌致病性及保护性抗原研究 | 第14-18页 |
| 1.5.1 Ⅳ型菌毛和粘附素 | 第15页 |
| 1.5.2 荚膜 | 第15-16页 |
| 1.5.3 脂多糖 | 第16页 |
| 1.5.4 外膜蛋白 | 第16-17页 |
| 1.5.5 多杀性巴氏杆菌毒素 | 第17页 |
| 1.5.6 其他毒力因子 | 第17-18页 |
| 1.6 筛选疫苗靶基因的方法 | 第18-20页 |
| 1.6.1 基因组学技术 | 第18页 |
| 1.6.2 蛋白质组学技术 | 第18-19页 |
| 1.6.3 生物芯片技术 | 第19-20页 |
| 第2章 引言 | 第20-22页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第20页 |
| 2.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 2.2.1 牛源多杀性巴氏杆菌保护性抗原候选基因的初步筛选及克隆表达 | 第20-21页 |
| 2.2.2 牛源巴氏杆菌保护性抗原候选分子的间接ELISA方法筛选 | 第21页 |
| 2.2.3 部分保护性抗原候选分子对小鼠的免疫保护性研究 | 第21页 |
| 2.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第3章 牛源多杀性巴氏杆菌保护性抗原的初步筛选及克隆表达 | 第22-42页 |
| 3.1 材料 | 第22-24页 |
| 3.1.1 菌株与培养基 | 第22页 |
| 3.1.2 试剂盒 | 第22页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 3.1.4 主要仪器及设备 | 第22-23页 |
| 3.1.5 主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| 3.2 方法 | 第24-30页 |
| 3.2.1 牛源A型多杀性巴氏杆菌候选基因的克隆 | 第24-25页 |
| 3.2.2 牛源A型多杀性巴氏杆菌候选基因重组载体的构建 | 第25-29页 |
| 3.2.3 牛源A型多杀性巴氏杆菌候选基因的表达 | 第29-30页 |
| 3.3 结果 | 第30-38页 |
| 3.3.1 生物信息学分析结果 | 第30-31页 |
| 3.3.2 特异性引物设计结果 | 第31-34页 |
| 3.3.3 目的基因PCR结果 | 第34-36页 |
| 3.3.4 目的蛋白的诱导表达 | 第36-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-42页 |
| 3.4.1 基于基因组学技术的初步筛选 | 第38页 |
| 3.4.2 引物的设计注意事项 | 第38-39页 |
| 3.4.3 载体的选择与构建 | 第39页 |
| 3.4.4 大肠杆菌表达系统诱导时间的优化 | 第39-42页 |
| 第4章 牛源巴氏杆菌保护性抗原候选分子的间接ELISA方法筛选 | 第42-54页 |
| 4.1 材料 | 第42-44页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.2 主要仪器和设备 | 第42-43页 |
| 4.1.3 主要试剂的配置 | 第43-44页 |
| 4.2 方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 不同血清型牛源多杀性巴氏杆菌抗血清的制备及效价测定 | 第44-45页 |
| 4.2.2 保护性抗原候选分子的大量诱导表达、纯化、复性及鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.3 保护性抗原候选分子的间接ELISA方法筛选 | 第46页 |
| 4.3 结果 | 第46-51页 |
| 4.3.1 纯化蛋白的SDS-PAGE电泳图 | 第46-48页 |
| 4.3.2 不同血清型牛源多杀性巴氏杆菌抗血清的抗体效价 | 第48页 |
| 4.3.3 保护性抗原候选分子的间接ELISA筛选结果 | 第48-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.4.1 纯化标签及包涵体的纯化方法 | 第51-52页 |
| 4.4.2 重组蛋白的复性 | 第52页 |
| 4.4.3 间接ELISA出现的问题 | 第52-53页 |
| 4.4.4 目的蛋白的筛选结果分析 | 第53-54页 |
| 第5章 部分保护性抗原候选分子对小鼠的免疫保护性研究 | 第54-60页 |
| 5.1 材料 | 第54页 |
| 5.1.1 菌种 | 第54页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第54页 |
| 5.1.3 试剂 | 第54页 |
| 5.2 方法 | 第54-55页 |
| 5.2.1 重组蛋白免疫小鼠 | 第54页 |
| 5.2.2 重组蛋白对小鼠的免疫保护性实验 | 第54-55页 |
| 5.3 结果 | 第55-58页 |
| 5.3.1 四种蛋白对A型巴氏杆菌的免疫保护率 | 第55-56页 |
| 5.3.2 四种蛋白对B型巴氏杆菌的免疫保护率 | 第56-57页 |
| 5.3.3 四种蛋白对F型巴氏杆菌的免疫保护率 | 第57-58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第6章 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附表 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
