| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 牦牛的种质特征 | 第11页 |
| 1.2 牦牛毛色选育的意义 | 第11-12页 |
| 1.3 哺乳动物毛色的形成 | 第12-13页 |
| 1.4 牦牛毛色候选基因的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.4.1 Agouti基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4.2 MITF基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.3 MC1R基因的研究进展 | 第16页 |
| 1.4.4 TYR基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 小鼠黑色素瘤细胞和shRNA研究进展 | 第17页 |
| 1.6 试验目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-24页 |
| 2.1 试验动物来源及组织样品的采集 | 第19-20页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第19-20页 |
| 2.1.1.1 皮肤采集 | 第19-20页 |
| 2.1.1.2 细胞来源 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.3 试验试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂及配置方法 | 第20页 |
| 2.2 Agouti、MITF、MC1R、TYR基因的荧光定量 | 第20-22页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及鉴定 | 第20页 |
| 2.2.2 样品总RNA提取方法 | 第20页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第20-21页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.5 Real-time PCR | 第22页 |
| 2.2.6 基因表达量分析 | 第22页 |
| 2.2.7 数据处理 | 第22页 |
| 2.3 牦牛皮肤组织石蜡切片 | 第22页 |
| 2.4 MC1R基因功能验证 | 第22-23页 |
| 2.5 小鼠黑色素瘤细胞模型实验方法 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与分析 | 第24-38页 |
| 3.1 牦牛目的基因表达量检测 | 第24-26页 |
| 3.1.1 牦牛皮肤组织提取mRNA检测 | 第24页 |
| 3.1.2 牦牛毛色目的基因荧光定量 | 第24-25页 |
| 3.1.3 目的基因表达量 | 第25-26页 |
| 3.2 石蜡组织切片 | 第26-28页 |
| 3.2.1 甲苯胺蓝染色 | 第26-27页 |
| 3.2.2 HE染色 | 第27-28页 |
| 3.3 MC1R基因功能验证 | 第28-38页 |
| 3.3.0 载体构建 | 第28页 |
| 3.3.1 shRNA的设计和合成 | 第28-32页 |
| 3.3.2 细胞转染 | 第32-33页 |
| 3.3.3 细胞黑色素浓度测定 | 第33-34页 |
| 3.3.4 小鼠黑色素瘤细胞mRNA提取测定 | 第34-35页 |
| 3.3.5 小鼠黑色素瘤细胞目的基因荧光定量 | 第35页 |
| 3.3.6 小鼠黑色素瘤细胞目的基因表达 | 第35-36页 |
| 3.3.7 细胞蛋白提取和WB测定 | 第36-38页 |
| 第四章 讨论 | 第38-43页 |
| 4.1 基因表达量与毛色的关系 | 第38-40页 |
| 4.1.1 Agouti基因相对表达量与毛色的关系 | 第38页 |
| 4.1.2 MC1R基因相对表达量与毛色的关系 | 第38-39页 |
| 4.1.3 MITF基因相对表达量与毛色的关系 | 第39页 |
| 4.1.4 TYR基因相对表达量与毛色的关系 | 第39-40页 |
| 4.2 组织切片 | 第40-41页 |
| 4.2.1 甲苯胺蓝染色 | 第40页 |
| 4.2.2 HE染色 | 第40-41页 |
| 4.3 MC1R基因功能验证 | 第41-43页 |
| 第五章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-53页 |
| 附录 | 第53-63页 |
| 英文缩略表 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 导师简介 | 第66-67页 |