| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 氨基酸脱羧酶及其产物 | 第12-17页 |
| 1.1 氨基酸脱羧酶 | 第12页 |
| 1.2 氨基酸脱羧酶产物 | 第12-17页 |
| 2 酪胺及酪氨酸脱羧酶 | 第17-18页 |
| 2.1 酪胺 | 第17页 |
| 2.2 酪胺应用价值 | 第17页 |
| 2.3 酪胺制备方法 | 第17-18页 |
| 3 β-丙氨酸及天冬氨酸α-脱羧酶 | 第18-22页 |
| 3.1 β-丙氨酸 | 第18页 |
| 3.2 β-丙氨酸应用价值 | 第18-19页 |
| 3.3 β-丙氨酸制备方法 | 第19-20页 |
| 3.4 天冬氨酸α-脱羧酶菌属来源 | 第20-21页 |
| 3.5 天冬氨酸α-脱羧酶催化机理 | 第21页 |
| 3.6 天冬氨酸α-脱羧酶酶学性质研究 | 第21-22页 |
| 4 胍丁胺及精氨酸脱羧酶 | 第22-24页 |
| 4.1 胍丁胺 | 第22页 |
| 4.2 胍丁胺应用价值 | 第22-23页 |
| 4.3 胍丁胺制备方法 | 第23页 |
| 4.4 精氨酸脱羧酶菌属来源 | 第23页 |
| 4.5 生物体内L-精氨酸代谢途径 | 第23-24页 |
| 5 本研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 重组酪氨酸脱羧酶酶学性质及其应用 | 第29-51页 |
| 第一节 酪氨酸脱羧酶基因工程菌构建及酶学性质研究 | 第29-42页 |
| 1.1 实验材料和仪器 | 第29-30页 |
| 1.1.1 实验试剂 | 第29页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 1.1.3 培养基 | 第30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 1.2.1 酪氨酸脱羧酶基因工程菌构建 | 第30-33页 |
| 1.2.2 酪氨酸脱羧酶工程菌诱导表达 | 第33页 |
| 1.2.3 酶学性质研究方法 | 第33-34页 |
| 1.3 实验结果 | 第34-41页 |
| 1.3.1 重组质粒pET-28a-tdc构建 | 第34-36页 |
| 1.3.2 酪氨酸脱羧酶酶活测定 | 第36页 |
| 1.3.3 重组酪氨酸脱羧酶酶学性质 | 第36-41页 |
| 1.4 结论 | 第41-42页 |
| 第二节 酪氨酸脱羧酶工业化探索 | 第42-50页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第42页 |
| 2.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 2.2.1 5L发酵罐发酵操作流程 | 第42-43页 |
| 2.2.2 菌液浓度测定 | 第43页 |
| 2.2.3 细胞生长曲线绘制 | 第43页 |
| 2.2.4 质粒丢失率的检测方法 | 第43页 |
| 2.2.5 基因工程菌pET-Duet-tdc/BL21的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.6 酶活性质检测 | 第44页 |
| 2.3 实验结果 | 第44-49页 |
| 2.3.1 重组基因工程菌DM2415种子细胞生长曲线 | 第44页 |
| 2.3.2 重组基因工程菌DM-2415发酵罐细胞生长曲线 | 第44-45页 |
| 2.3.3 重组基因工程菌DM2415不同发酵阶段质粒的稳定性 | 第45-46页 |
| 2.3.4 基因工程菌pET-Duet-tdc/BL21的制备 | 第46-47页 |
| 2.3.5 基因工程菌DM2415和DM2416的质粒稳定性比较 | 第47-49页 |
| 2.3.6 基因工程菌DM2415和DM2416酶活性质比较 | 第49页 |
| 2.4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第三章 重组天冬氨酸-α-脱羧酶酶学性质及其应用 | 第51-66页 |
| 第一节 重组天冬氨酸-α-脱羧酶工程菌的构建及酶学性质 | 第51-59页 |
| 1.1 实验材料与仪器 | 第51页 |
| 1.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 1.2.1 pandc基因来源 | 第51-52页 |
| 1.2.2 工程菌构建 | 第52页 |
| 1.2.3 天冬氨酸α-脱羧酶工程菌诱导表达 | 第52页 |
| 1.2.4 湿菌体制备 | 第52-53页 |
| 1.2.5 生物转化 | 第53页 |
| 1.2.6 酶活测定 | 第53页 |
| 1.2.7 β-Ala标准曲线绘制 | 第53页 |
| 1.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 1.3.1 重组质粒pET-Duet-pandc构建 | 第53页 |
| 1.3.2 基因序列测定 | 第53页 |
| 1.3.3 pET-Duet-pandc质粒双酶切验证及工程菌蛋白表达 | 第53-55页 |
| 1.3.4 工程菌DM2417和DM2418酶活检测 | 第55-56页 |
| 1.3.5 工程菌DM2417和DM2418酶学性质研究及比较 | 第56-58页 |
| 1.4 结论 | 第58-59页 |
| 第二节 重组菌DM2418酶活优化 | 第59-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第60页 |
| 2.1.1 菌种 | 第60页 |
| 2.1.2 实验试剂及仪器 | 第60页 |
| 2.1.3 培养基 | 第60页 |
| 2.2 实验方法 | 第60页 |
| 2.2.1 湿菌体制备 | 第60页 |
| 2.2.2 生物转化 | 第60页 |
| 2.2.3 粗酶液制备 | 第60页 |
| 2.2.4 Bradford蛋白定量法测粗酶蛋白质含量 | 第60页 |
| 2.3 实验结果 | 第60-64页 |
| 2.3.1 重组菌DM2417和DM2418蛋白质含量测定 | 第60-61页 |
| 2.3.2 发酵温度对DM2417和DM2418单位酶活影响 | 第61页 |
| 2.3.3 预水浴温度对DM2417和DM2418酶活影响 | 第61-64页 |
| 2.3.4 预水浴时间对DM2418酶活影响 | 第64页 |
| 2.4 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第四章 重组精氨酸脱羧酶酶学性质及其应用 | 第66-82页 |
| 第一节 精氨酸脱羧酶基因工程菌的构建及酶学性质 | 第66-78页 |
| 1.1 实验材料与仪器 | 第66页 |
| 1.1.1 实验试剂 | 第66页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第66页 |
| 1.1.3 培养基 | 第66页 |
| 1.2 实验方法 | 第66-68页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第66-67页 |
| 1.2.2 构建步骤参照第二章第一节 | 第67页 |
| 1.2.3 重组质粒的双酶切验证 | 第67页 |
| 1.2.4 重组精氨酸脱羧酶诱导表达 | 第67页 |
| 1.2.5 诱导温度对重组蛋白表达影响 | 第67页 |
| 1.2.6 湿菌体制备 | 第67页 |
| 1.2.7 生物转化 | 第67页 |
| 1.2.8 精氨酸脱羧酶蛋白粗纯化 | 第67-68页 |
| 1.2.9 酶活测定 | 第68页 |
| 1.2.10 L-精氨酸标准曲线绘制 | 第68页 |
| 1.3 实验结果 | 第68-77页 |
| 1.3.1 重组质粒pET28a-adiA构建 | 第68页 |
| 1.3.2 PCR扩增鉴定 | 第68页 |
| 1.3.3 限制性内切酶消化后DNA胶回收鉴定 | 第68页 |
| 1.3.4 重组质粒双酶切验证 | 第68-70页 |
| 1.3.5 基因序列测定 | 第70页 |
| 1.3.6 重组精氨酸脱羧酶诱导表达 | 第70-71页 |
| 1.3.7 诱导温度对重组蛋白表达影响 | 第71页 |
| 1.3.8 L-精氨酸标准曲线 | 第71页 |
| 1.3.9 重组精氨酸脱羧酶活测定 | 第71-73页 |
| 1.3.10 精氨酸脱羧酶粗酶活性测定 | 第73页 |
| 1.3.11 重组精氨酸脱羧酶酶活性质 | 第73-77页 |
| 1.4 结论 | 第77-78页 |
| 第二节 两种基因来源的重组精氨酸脱羧酶酶学性质比较 | 第78-81页 |
| 2.1 实验材料 | 第78页 |
| 2.1.1 菌种 | 第78页 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 | 第78页 |
| 2.1.3 培养基 | 第78页 |
| 2.2 实验方法 | 第78页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第78-81页 |
| 2.3.1 aADC与sADC转化温度比较 | 第78-80页 |
| 2.3.2 aADC与sADC转化液pH比较 | 第80页 |
| 2.3.3 aADC和sADC底物浓度比较 | 第80页 |
| 2.3.4 aADC与sADC转化率比较 | 第80-81页 |
| 2.4 结论 | 第81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 总结 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
