| 摘要 | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-14页 |
| 第一章 人脐静脉内皮细胞培养体系的建立与细胞活力的测定 | 第14-22页 |
| 1 试验材料 | 第14-15页 |
| 1.1 试验对象 | 第14页 |
| 1.2 试验试剂 | 第14页 |
| 1.3 试验仪器 | 第14-15页 |
| 2 试验方法 | 第15-17页 |
| 2.1 人脐静脉内皮细胞的培养 | 第15-16页 |
| 2.1.1 HUVEC原代分离培养 | 第15页 |
| 2.1.2 原代细胞不同接种密度的比较 | 第15页 |
| 2.1.3 HUVEC传代时胰酶处理时间的比较 | 第15-16页 |
| 2.2 细胞的形态学观察与鉴定 | 第16-17页 |
| 2.2.1 倒置相差显微镜观察内皮细胞生长情况 | 第16页 |
| 2.2.2 vWF抗体免疫荧光法鉴定HUVEC细胞 | 第16-17页 |
| 2.3 CCK-8法测定内皮细胞的增殖活力的影响,筛选给药物的最适浓度 | 第17页 |
| 3 结果与分析 | 第17-20页 |
| 3.1 人脐静脉内皮细胞的优化培养与鉴定 | 第17-19页 |
| 3.1.1 胶原酶不同消化时间对细胞纯度的影响 | 第17-19页 |
| 3.1.2 不同接种密度细胞生长状态的比较 | 第19页 |
| 3.1.3 不同胰酶消化时间对传代后细胞数量及活力的影响 | 第19页 |
| 3.2 CCK-8法测定内皮细胞的增殖情况 | 第19-20页 |
| 4 分析与讨论 | 第20-22页 |
| 4.1 HUVEC分离培养条件的优化 | 第20-21页 |
| 4.2 HUVEC培养基的选择 | 第21页 |
| 4.3 CCK-8检测细胞增殖,筛选最适给药浓度 | 第21-22页 |
| 第二章 氟、砷单独及联合暴露对内皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响 | 第22-33页 |
| 1 试验材料 | 第22-23页 |
| 1.1 脐静脉内皮细胞 | 第22页 |
| 1.2 试验试剂 | 第22页 |
| 1.3 试验仪器 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-29页 |
| 2.1 氟、砷单独或联合暴露人脐静脉内皮细胞 | 第23页 |
| 2.2 氟、砷单独或联合给药后,细胞总RNA的提取,质量的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.4 Real-time RT-PCR反应体系的建立 | 第25-26页 |
| 2.5 Western blot检测内皮细胞VCAM-1蛋白表达 | 第26-28页 |
| 2.5.1 氟、砷单独或联合给药后,细胞总蛋白的提取 | 第26-27页 |
| 2.5.2 蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| 2.5.3 Western blot具体操作步骤 | 第27-28页 |
| 2.6 细胞凋亡染色的检测 | 第28-29页 |
| 2.7 数据分析 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 3.1 炎症反应相关基因mRNA表达的结果 | 第29-31页 |
| 3.2 炎症反应相关蛋白VCAM-1表达水平的结果 | 第31页 |
| 3.3 细胞凋亡结果的检测 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 氟、砷单独或联合暴露对内皮细胞氧化应激损伤机制的研究 | 第33-44页 |
| 1 试验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 脐静脉内皮细胞 | 第33页 |
| 1.2 试验试剂 | 第33页 |
| 1.3 试验仪器 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-38页 |
| 2.1 细胞内ROS含量的测定 | 第34页 |
| 2.2 细胞内超氧化物阴离子水平的检测 | 第34-35页 |
| 2.3 细胞总蛋白MDA含量的测定 | 第35页 |
| 2.4 细胞NADPH氧化酶(NOX)活性的检测 | 第35-36页 |
| 2.5 氟、砷暴露对内皮细胞氧化应激相关基因表达量的影响 | 第36-37页 |
| 2.6 细胞总SOD活性的测定(WST-8法) | 第37页 |
| 2.7 细胞内NO含量的检测 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.1 细胞内ROS含量检测结果 | 第38-39页 |
| 3.2 细胞内超氧阴离子的检测结果 | 第39-40页 |
| 3.3 细胞内MDA含量的检测结果 | 第40页 |
| 3.4 细胞内NADPH氧化酶(NOX)活力的检测结果 | 第40-41页 |
| 3.5 氧化应激相关基因mRNA表达的结果 | 第41页 |
| 3.6 细胞内SOD活性的检测结果 | 第41-42页 |
| 3.7 细胞内NO含量的检测结果 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| Abstract | 第49-50页 |
| 致谢 | 第51页 |
