中文摘要 | 第1-13页 |
Abstract | 第13-15页 |
1 前言 | 第15-25页 |
·犬瘟热病毒的结构及生物学特征 | 第15-16页 |
·CDV的分类地位 | 第15页 |
·CDV的形态和理化特性 | 第15-16页 |
·CDV的培养特征 | 第16页 |
·CDV的生物学结构 | 第16-18页 |
·CDV的基因组结构 | 第16-17页 |
·CDV的结构蛋白及非结构蛋白 | 第17-18页 |
·核衣壳蛋白 | 第17页 |
·磷蛋白 | 第17页 |
·基质膜蛋白 | 第17-18页 |
·融合蛋白 | 第18页 |
·附着或血凝蛋白 | 第18页 |
·大蛋白 | 第18页 |
·CDV的流行病学 | 第18-19页 |
·CD的临床症状 | 第19-20页 |
·CD致病机制研究 | 第20页 |
·CD的诊断与检测 | 第20-22页 |
·包涵体检查 | 第20页 |
·特异性抗原和抗体检测 | 第20-21页 |
·分子生物学诊断方法 | 第21-22页 |
·聚合酶链式反应 | 第21页 |
·核酸探针技术 | 第21-22页 |
·CD的预防和控制 | 第22页 |
·CD的疫苗种类 | 第22-24页 |
·DNA疫苗 | 第22-23页 |
·基因工程亚单位疫苗 | 第23-24页 |
·重组活载体疫苗 | 第24页 |
·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
2 材料与方法 | 第25-40页 |
·山东省部分地区CDV感染状况调查的材料和方法 | 第25-29页 |
·材料 | 第25-26页 |
·临床样品 | 第25页 |
·主要试剂 | 第25页 |
·主要仪器设备 | 第25页 |
·主要溶液的配制 | 第25-26页 |
·引物设计 | 第26页 |
·方法 | 第26-29页 |
·临床症状及病理剖检 | 第26页 |
·组织及血清样品的处理 | 第26页 |
·细菌检测 | 第26-27页 |
·CDV胶体金试纸条检测样品 | 第27页 |
·CDV的RT-PCR检测 | 第27-28页 |
·RNA的提取及反转录处理 | 第27-28页 |
·CDV N基因的扩增 | 第28页 |
·测序 | 第28页 |
·诸城市出栏水貂CDV抗体检测 | 第28-29页 |
·流行情况调查结果统计 | 第29页 |
·2013-2014年流行毒株HA基因遗传变异分析的材料和方法 | 第29-33页 |
·材料 | 第29-30页 |
·样品 | 第29页 |
·主要试剂 | 第29页 |
·主要仪器设备 | 第29-30页 |
·主要溶液的配置 | 第30页 |
·引物设计 | 第30页 |
·方法 | 第30-33页 |
·样品处理 | 第30页 |
·CDV HA基因的扩增 | 第30页 |
·CDV HA基因的克隆测序 | 第30-33页 |
·PCR产物的回收 | 第30-31页 |
·胶回收产物与pEASY-T1克隆载体的连接 | 第31页 |
·大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)的制备 | 第31-32页 |
·连接产物转化 | 第32页 |
·质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
·重组质粒的双酶切鉴定 | 第33页 |
·阳性克隆的序列测定及HA基因的遗传进化分析 | 第33页 |
·6 个山东犬瘟热病毒分离株HA基因推导的氨基酸序列分析 | 第33页 |
·CDV分离鉴定及全基因序列测定的材料和方法 | 第33-40页 |
·材料 | 第33-35页 |
·细胞与病毒 | 第33-34页 |
·主要试剂与仪器 | 第34页 |
·细胞培养相关溶液 | 第34页 |
·引物设计 | 第34-35页 |
·方法 | 第35-40页 |
·样品处理 | 第35页 |
·细胞复苏 | 第35页 |
·病毒分离 | 第35-36页 |
·病毒的RT-PCR鉴定 | 第36页 |
·病毒细胞半数感染量(TCID50)的测定 | 第36页 |
·直接免疫荧光抗体试验 | 第36页 |
·病毒微量中和实验 | 第36-37页 |
·动物回归试验及样品采集 | 第37页 |
·组织学病变观察 | 第37-38页 |
·石蜡切片的制作方法 | 第37页 |
·HE(苏木精-伊红)染色 | 第37-38页 |
·细胞适应株CDV-ZC株的全基因序列测定 | 第38-40页 |
·病毒RNA的提取及cDNA的合成 | 第38页 |
·目的片段的扩增 | 第38页 |
·PCR产物的克隆 | 第38-39页 |
·测序结果拼接与分析 | 第39-40页 |
·CDV-ZC株HA基因的限制性片段多态性分析(RFLP) | 第40页 |
3 结果与分析 | 第40-56页 |
·山东省部分地区CDV感染状况调查的结果 | 第40-43页 |
·毛皮动物犬瘟热临床症状及病理学变化 | 第40-41页 |
·细菌性病原的检测结果 | 第41-42页 |
·临床样品的检测结果 | 第42页 |
·血清学检测结果 | 第42-43页 |
·CD流行的时间分布规律 | 第43页 |
·2013-2014年流行毒株HA基因遗传变异分析结果 | 第43-49页 |
·CDV HA基因的遗传变异分析 | 第43-49页 |
·HA基因的扩增 | 第43-44页 |
·CDV-H-PMD18T重组质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
·CDV HA基因序列测定 | 第44-45页 |
·CDV HA基因同源性及遗传进化分析 | 第45-48页 |
·6 个山东犬瘟热病毒分离株HA基因推导的氨基酸序列分析结果 | 第48-49页 |
·CDV分离鉴定及全基因测序结果 | 第49-56页 |
·病毒分离结果 | 第49页 |
·RT-PCR鉴定结果 | 第49页 |
·CDV-ZC株毒价测定结果 | 第49-50页 |
·直接荧光抗体试验(FAT)结果 | 第50页 |
·病毒微量中和实验(VNA)结果 | 第50-51页 |
·分离毒株貉攻毒试验结果 | 第51页 |
·病理组织切片观察结果 | 第51-52页 |
·CDV-ZC株全基因序列测定结果 | 第52-56页 |
·全基因RT-PCR扩增结果 | 第52-53页 |
·序列测定结果 | 第53页 |
·CDV-ZC株序列分析 | 第53-56页 |
·CDV-ZC株基因编码区及全基因核苷酸序列同源性比对 | 第53页 |
·基于CDV-ZC株全基因序列构建系统发生树 | 第53-54页 |
·CDV-ZC株HA基因的RFLP结果 | 第54-55页 |
·CDV-ZC株HA基因推导的氨基酸序列分析 | 第55-56页 |
4 讨论 | 第56-59页 |
·山东省部分地区毛皮动物CDV流行情况调查 | 第56页 |
·6 个山东CDV野毒株HA基因的遗传变异分析 | 第56-57页 |
·CDV-ZC株的分离和鉴定 | 第57-59页 |
5 结论 | 第59-60页 |
6 参考文献 | 第60-67页 |
7 致谢 | 第67-68页 |
8 攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |