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毛皮动物犬瘟热的流行情况及一株犬瘟热病毒的生物学特性研究

中文摘要第1-13页
Abstract第13-15页
1 前言第15-25页
   ·犬瘟热病毒的结构及生物学特征第15-16页
     ·CDV的分类地位第15页
     ·CDV的形态和理化特性第15-16页
     ·CDV的培养特征第16页
   ·CDV的生物学结构第16-18页
     ·CDV的基因组结构第16-17页
     ·CDV的结构蛋白及非结构蛋白第17-18页
       ·核衣壳蛋白第17页
       ·磷蛋白第17页
       ·基质膜蛋白第17-18页
       ·融合蛋白第18页
       ·附着或血凝蛋白第18页
       ·大蛋白第18页
   ·CDV的流行病学第18-19页
   ·CD的临床症状第19-20页
   ·CD致病机制研究第20页
   ·CD的诊断与检测第20-22页
     ·包涵体检查第20页
     ·特异性抗原和抗体检测第20-21页
     ·分子生物学诊断方法第21-22页
       ·聚合酶链式反应第21页
       ·核酸探针技术第21-22页
   ·CD的预防和控制第22页
   ·CD的疫苗种类第22-24页
     ·DNA疫苗第22-23页
     ·基因工程亚单位疫苗第23-24页
     ·重组活载体疫苗第24页
   ·本研究的目的与意义第24-25页
2 材料与方法第25-40页
   ·山东省部分地区CDV感染状况调查的材料和方法第25-29页
     ·材料第25-26页
       ·临床样品第25页
       ·主要试剂第25页
       ·主要仪器设备第25页
       ·主要溶液的配制第25-26页
       ·引物设计第26页
     ·方法第26-29页
       ·临床症状及病理剖检第26页
       ·组织及血清样品的处理第26页
       ·细菌检测第26-27页
       ·CDV胶体金试纸条检测样品第27页
       ·CDV的RT-PCR检测第27-28页
         ·RNA的提取及反转录处理第27-28页
         ·CDV N基因的扩增第28页
         ·测序第28页
       ·诸城市出栏水貂CDV抗体检测第28-29页
       ·流行情况调查结果统计第29页
   ·2013-2014年流行毒株HA基因遗传变异分析的材料和方法第29-33页
     ·材料第29-30页
       ·样品第29页
       ·主要试剂第29页
       ·主要仪器设备第29-30页
       ·主要溶液的配置第30页
       ·引物设计第30页
     ·方法第30-33页
       ·样品处理第30页
       ·CDV HA基因的扩增第30页
       ·CDV HA基因的克隆测序第30-33页
         ·PCR产物的回收第30-31页
         ·胶回收产物与pEASY-T1克隆载体的连接第31页
         ·大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)的制备第31-32页
         ·连接产物转化第32页
         ·质粒DNA的提取第32-33页
         ·重组质粒的双酶切鉴定第33页
         ·阳性克隆的序列测定及HA基因的遗传进化分析第33页
         ·6 个山东犬瘟热病毒分离株HA基因推导的氨基酸序列分析第33页
   ·CDV分离鉴定及全基因序列测定的材料和方法第33-40页
     ·材料第33-35页
       ·细胞与病毒第33-34页
       ·主要试剂与仪器第34页
       ·细胞培养相关溶液第34页
       ·引物设计第34-35页
     ·方法第35-40页
       ·样品处理第35页
       ·细胞复苏第35页
       ·病毒分离第35-36页
       ·病毒的RT-PCR鉴定第36页
       ·病毒细胞半数感染量(TCID50)的测定第36页
       ·直接免疫荧光抗体试验第36页
       ·病毒微量中和实验第36-37页
       ·动物回归试验及样品采集第37页
       ·组织学病变观察第37-38页
         ·石蜡切片的制作方法第37页
         ·HE(苏木精-伊红)染色第37-38页
       ·细胞适应株CDV-ZC株的全基因序列测定第38-40页
         ·病毒RNA的提取及cDNA的合成第38页
         ·目的片段的扩增第38页
         ·PCR产物的克隆第38-39页
         ·测序结果拼接与分析第39-40页
         ·CDV-ZC株HA基因的限制性片段多态性分析(RFLP)第40页
3 结果与分析第40-56页
   ·山东省部分地区CDV感染状况调查的结果第40-43页
     ·毛皮动物犬瘟热临床症状及病理学变化第40-41页
     ·细菌性病原的检测结果第41-42页
     ·临床样品的检测结果第42页
     ·血清学检测结果第42-43页
     ·CD流行的时间分布规律第43页
   ·2013-2014年流行毒株HA基因遗传变异分析结果第43-49页
     ·CDV HA基因的遗传变异分析第43-49页
       ·HA基因的扩增第43-44页
       ·CDV-H-PMD18T重组质粒的酶切鉴定第44页
       ·CDV HA基因序列测定第44-45页
       ·CDV HA基因同源性及遗传进化分析第45-48页
       ·6 个山东犬瘟热病毒分离株HA基因推导的氨基酸序列分析结果第48-49页
   ·CDV分离鉴定及全基因测序结果第49-56页
     ·病毒分离结果第49页
     ·RT-PCR鉴定结果第49页
     ·CDV-ZC株毒价测定结果第49-50页
     ·直接荧光抗体试验(FAT)结果第50页
     ·病毒微量中和实验(VNA)结果第50-51页
     ·分离毒株貉攻毒试验结果第51页
     ·病理组织切片观察结果第51-52页
     ·CDV-ZC株全基因序列测定结果第52-56页
       ·全基因RT-PCR扩增结果第52-53页
       ·序列测定结果第53页
       ·CDV-ZC株序列分析第53-56页
         ·CDV-ZC株基因编码区及全基因核苷酸序列同源性比对第53页
         ·基于CDV-ZC株全基因序列构建系统发生树第53-54页
         ·CDV-ZC株HA基因的RFLP结果第54-55页
         ·CDV-ZC株HA基因推导的氨基酸序列分析第55-56页
4 讨论第56-59页
   ·山东省部分地区毛皮动物CDV流行情况调查第56页
   ·6 个山东CDV野毒株HA基因的遗传变异分析第56-57页
   ·CDV-ZC株的分离和鉴定第57-59页
5 结论第59-60页
6 参考文献第60-67页
7 致谢第67-68页
8 攻读学位期间发表论文情况第68页

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