| 摘要 | 第1-9页 |
| 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 猪肺炎支原体致病机理及毒力因子研究进展 | 第9-11页 |
| ·猪肺炎支原体致病机理研究进展 | 第9-10页 |
| ·猪肺炎支原体毒力相关因子研究进展 | 第10-11页 |
| 2 差异蛋白质组学技术研究进展 | 第11-14页 |
| ·双向凝胶电泳技术 | 第11-12页 |
| ·荧光双向差异凝胶电泳技术 | 第12页 |
| ·iTRAQ技术 | 第12页 |
| ·多维液相色谱技术 | 第12-13页 |
| ·同位素亲和标签技术 | 第13页 |
| ·蛋白质芯片技术 | 第13页 |
| ·质谱分析技术 | 第13页 |
| ·生物信息学分析 | 第13-14页 |
| 3 差异蛋白质组学在Mhp研究中的应用 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 试验一 猪肺炎支原体168强、弱毒株感染STEC细胞条件的筛选 | 第16-20页 |
| 1 试验材料 | 第16-17页 |
| ·细胞、菌种及菌株培养基 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·主要溶液配制 | 第16-17页 |
| 2 试验方法 | 第17-19页 |
| ·Mhp168强、弱毒株的复苏与扩大培养 | 第17页 |
| ·STEC细胞的培养 | 第17页 |
| ·Mhp168强、弱毒株感染细胞 | 第17-18页 |
| ·感染剂量及感染时间 | 第18页 |
| ·Mhp全菌蛋白提取 | 第18页 |
| ·Mhp全菌蛋白浓度的测定 | 第18页 |
| ·数据统计 | 第18-19页 |
| 3 结果与分析 | 第19页 |
| ·Mhp168强、弱毒株感染量及感染时间的筛选 | 第19页 |
| 4. 小结 | 第19-20页 |
| 试验二：感染诱导猪肺炎支原体168株差异表达蛋白的筛选 | 第20-31页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| ·细胞、菌种及菌株培养基 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·主要溶液及配制 | 第20-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-26页 |
| ·Mhp168菌株的培养 | 第22-23页 |
| ·STEC细胞的培养 | 第23页 |
| ·Mhp强、弱毒株感染细胞 | 第23页 |
| ·Mhp菌体蛋白的制备与纯化 | 第23-24页 |
| ·Mhp全菌蛋白浓度的测定 | 第24页 |
| ·菌体蛋白双向电泳 | 第24-25页 |
| ·蛋白凝胶拍照及分析 | 第25页 |
| ·蛋白样品的质谱样鉴定 | 第25-26页 |
| ·蛋白样品的Western-blot验证 | 第26页 |
| ·数据统计 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-30页 |
| ·感染前后Mhp168强、弱毒株蛋白双向电泳结果 | 第26-27页 |
| ·MALDI-TOF-MS结果 | 第27-30页 |
| ·Western-blot结果 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 试验三 Mhp168 EF-TU基因的原核表达及鉴定 | 第31-45页 |
| 1 试验材料 | 第31-33页 |
| ·菌株、表达载体及感受态细胞 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·主要溶液及配方 | 第31-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-39页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33页 |
| ·Mhp168菌液DNA的提取 | 第33页 |
| ·模板DNA的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·目的基因的回收及纯化 | 第34页 |
| ·目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·转化后菌液质粒的提取、鉴定及测序 | 第35页 |
| ·pET-28a(+)/EF-TU的构建 | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化、转化后菌液质粒的提取及鉴定 | 第36-37页 |
| ·pET-28a(+)/EF-TU的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第37页 |
| ·诱导条件的筛选 | 第37页 |
| ·诱导表达蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第38-39页 |
| 3 试验结果 | 第39-44页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39页 |
| ·pMD18-T/EF-TU的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·pMD18-T/EF-TU的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·pET-28a(+)/EF-TU的双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·pET-28a(+)/EF-TU的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·诱导表达蛋白的SDS-PAGE结果 | 第41页 |
| ·诱导表达条件的筛选 | 第41-42页 |
| ·诱导蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·表达蛋白的纯化结果 | 第43页 |
| ·表达产物的Western-blot的鉴定 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-48页 |
| 1. 猪肺炎支原体感染细胞前后差异蛋白质组学分析 | 第45-46页 |
| 2. 支原体EF-TU蛋白研究进展 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| Abstract | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
