| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略词对照表 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 一、植物体内与衰老相关的蛋白酶 | 第13-18页 |
| ·植物衰老过程以及相关蛋白酶研究进展 | 第13-14页 |
| ·植物体内主要蛋白水解酶在植物衰老过程中的作用 | 第14-18页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶在衰老过程中的作用 | 第14-15页 |
| ·氨酸蛋白酶在衰老过程中的作用 | 第15-17页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶在衰老过程中的作用 | 第17-18页 |
| ·金属蛋白酶在衰老过程中的作用 | 第18页 |
| 二、植物枯草杆菌类丝氨酸蛋白酶subtilase(SBTs) | 第18-23页 |
| ·SBTs的催化活性位点和其分类 | 第19页 |
| ·SBTs的结构 | 第19-20页 |
| ·SBTs的生化特性 | 第20-21页 |
| ·SBTs在植物体内的功能 | 第21-23页 |
| 前言 | 第23-25页 |
| 第一章 小麦叶片中两种衰老相关蛋白酶的初步鉴定 | 第25-31页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·仪器与试剂 | 第25页 |
| ·粗酶液提取 | 第25页 |
| ·蛋白酶活性电泳及其染色方法 | 第25-26页 |
| ·叶片离体暗诱导处理不同时间后蛋白酶活性的变化 | 第26页 |
| ·两种蛋白酶性质的初步鉴定 | 第26-27页 |
| ·温度对蛋白酶活性的影响 | 第26页 |
| ·pH对蛋白酶活性的影响 | 第26页 |
| ·蛋白酶的热稳定性 | 第26-27页 |
| ·不同抑制剂对蛋白酶活性的影响 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-29页 |
| ·叶片离体暗诱导处理不同时间后蛋白酶活性的变化 | 第27-28页 |
| ·温度对蛋白酶S1和S2活性的影响 | 第28页 |
| ·pH对蛋白酶S1和S2活性的影响 | 第28页 |
| ·蛋白酶S1和S2的热稳定性 | 第28-29页 |
| ·抑制剂对蛋白酶S1和S2活性的影响 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 小麦叶片中两种衰老相关蛋白酶的分离纯化 | 第31-43页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·仪器与试剂 | 第31页 |
| ·小麦叶片暗诱导处理 | 第31页 |
| ·粗酶液提取 | 第31页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第31页 |
| ·蛋白酶活性电泳及其染色方法 | 第31-32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和染色方法 | 第32-33页 |
| ·十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第32页 |
| ·非完全变性SDS-PAGE | 第32页 |
| ·考马斯亮蓝R-250染色 | 第32页 |
| ·银染法 | 第32-33页 |
| ·两种蛋白酶的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·粗酶液提取 | 第33页 |
| ·热变性处理 | 第33页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第33页 |
| ·Sephdex G-25层析脱盐 | 第33页 |
| ·Q-sephrose fast flow阴离子交换柱层析 | 第33-34页 |
| ·超滤浓缩 | 第34页 |
| ·电泳分析和蛋白回收 | 第34页 |
| ·蛋白质谱鉴定 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-40页 |
| ·热变性处理和硫酸铵沉淀 | 第34-35页 |
| ·Q-sepherose fast flow阴离子交换层析 | 第35-36页 |
| ·凝胶电泳分离和目的蛋白酶回收 | 第36-37页 |
| ·不同染色方法对纯化后蛋白酶样品的检测 | 第37-38页 |
| ·两种蛋白酶分子量的测定 | 第38-39页 |
| ·两种蛋白酶的质谱鉴定 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 暗诱导衰老小麦叶片中两种TaSSP1形式蛋白酶生化特性以及生理功能的初步鉴定 | 第43-57页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·仪器与试剂 | 第43页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第43页 |
| ·蛋白酶活性电泳及其染色方法 | 第43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和染色方法 | 第43页 |
| ·两种蛋白酶的理化性质鉴定 | 第43-44页 |
| ·温度对两个蛋白酶活性的影响 | 第43-44页 |
| ·pH对两个蛋白酶活性的影响 | 第44页 |
| ·两个蛋白酶的热稳定性 | 第44页 |
| ·金属离子对两个蛋白酶活性的影响 | 第44页 |
| ·蛋白酶类型的确定 | 第44-45页 |
| ·不同SDS浓度对蛋白酶活性的影响 | 第45页 |
| ·Western-blot分析纯化后蛋白酶和TaSSP1的关系 | 第45页 |
| ·非生物胁迫处理下蛋白酶表达水平变化 | 第45-46页 |
| ·暗诱导和不同激素处理离体小麦叶片蛋白酶表达水平的变化 | 第46页 |
| 2 结果和分析 | 第46-54页 |
| ·蛋白酶S1和S2的生化特性分析 | 第46-49页 |
| ·不同抑制剂对蛋白酶S1和S2的影响 | 第49页 |
| ·不同浓度SDS对蛋白酶S1和S2活性的影响 | 第49-50页 |
| ·Western-blot分析纯化后蛋白酶和TaSSP1的关系 | 第50-51页 |
| ·非生物胁迫处理小麦植株后蛋白酶表达水平的变化 | 第51-53页 |
| ·暗诱导和不同激素处理离体小麦叶片蛋白酶表达水平的变化 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 全文结论 | 第57-59页 |
| 创新之处 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
