| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 材料与方法 | 第8-40页 |
| 一 实验材料 | 第8-18页 |
| 1. 实验动物 | 第8页 |
| 2. 菌株 | 第8页 |
| 3. 质粒载体 | 第8-12页 |
| 4. 细菌用培养基 | 第12页 |
| 5. 细胞系及培养基 | 第12页 |
| 6. 工具酶及DNA分子量标准 | 第12-13页 |
| 7. 主要仪器设备及软件 | 第13页 |
| 8. 主要化学试剂及耗材 | 第13-15页 |
| 9. 引物的设计与合成 | 第15页 |
| 10. 引物的设计与合成 | 第15-18页 |
| 二、实验方法 | 第18-40页 |
| 1. 生物信息学分析 | 第18页 |
| 2. 细胞总RNA的提取和逆转录 | 第18-19页 |
| 3. 实时定量PCR Quantitative Real-Time PCR(qRT-PCR) | 第19-20页 |
| 4. 基因克隆 | 第20-23页 |
| 5. 质粒转化与质粒提取 | 第23-24页 |
| 6. 重组克隆的筛选与鉴定 | 第24-25页 |
| 7. 细胞培养相关实验 | 第25-28页 |
| 8. N端带HaLoTag标签的人源TRIM69重组蛋白质的表达和纯化 | 第28-31页 |
| 9. 蛋白质分析相关实验 | 第31-34页 |
| 10. 小鼠基因型鉴定 | 第34-36页 |
| 11. 小鼠低压低氧刺激 | 第36页 |
| 12. HE染色 | 第36-37页 |
| 13. 免疫组化实验 | 第37-38页 |
| 14. TUNEL法检测细胞凋亡(Roche凋亡试剂盒) | 第38-40页 |
| 前言 | 第40-43页 |
| 结果 | 第43-57页 |
| 1. TRIM69是一个睾丸组织高表达蛋白 | 第43-49页 |
| ·TRIM69在小鼠体内的时空表达检测 | 第43页 |
| ·Trim69基因敲除小鼠的制备 | 第43-44页 |
| ·Trim69基因敲除小鼠的鉴定 | 第44-45页 |
| ·Trim69基因敲除鼠形态学检测 | 第45-46页 |
| ·低氧刺激对Trim69敲除鼠睾丸组织的影响 | 第46-47页 |
| ·Cas9/RNA-mediated Trim69 gene targeting Mice | 第47-49页 |
| 2. TRIM69能够抑制DNA损伤引起的细胞凋亡 | 第49-55页 |
| ·筛选有TRIM69表达的细胞 | 第49-50页 |
| ·过表达TRIM69能够抑制UV刺激引起的细胞凋亡 | 第50-53页 |
| ·TRIM69能够抑制Etoposide刺激引起的细胞凋亡 | 第53页 |
| ·细胞内源性TRIM69敲低后可促进Cisplatin刺激引起的细胞凋亡 | 第53-55页 |
| 3. TRIM69蛋白体外表达与纯化 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 1. TRIM69是一个睾丸组织高表达蛋白 | 第57-58页 |
| 2. TRIM69能够抑制DNA损伤引起的细胞凋亡 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 综述 | 第65-73页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
