| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-12页 |
| 1 实验材料 | 第12-16页 |
| ·细胞与病毒 | 第12页 |
| ·工程菌 | 第12页 |
| ·质粒 | 第12-13页 |
| ·抗体 | 第13页 |
| ·酶 | 第13页 |
| ·试剂盒 | 第13-14页 |
| ·化学试剂 | 第14-15页 |
| ·引物、探针合成及测序 | 第15页 |
| ·实验仪器及型号 | 第15-16页 |
| 2. 实验方法 | 第16-25页 |
| ·质粒构建 | 第16-19页 |
| ·PCR扩增目的条带 | 第16-17页 |
| ·酶切及纯化 | 第17页 |
| ·连接 | 第17页 |
| ·感受态细胞制备 | 第17-18页 |
| ·转化 | 第18页 |
| ·质粒小提及鉴定 | 第18页 |
| ·质粒大提 | 第18-19页 |
| ·质粒转染 | 第19-20页 |
| ·脂质体转染 | 第19页 |
| ·磷酸钙污染 | 第19-20页 |
| ·病毒感染 | 第20页 |
| ·单细胞克隆挑取 | 第20页 |
| ·Western Blot | 第20-22页 |
| ·蛋白定量 | 第20-21页 |
| ·Western Blot分析 | 第21-22页 |
| ·IFA | 第22-23页 |
| ·HCV滴度测定 | 第23页 |
| ·qRT-PCR | 第23-24页 |
| ·细胞核型分析 | 第24-25页 |
| ·免疫共沉淀 | 第25页 |
| 3. 实验结果 | 第25-44页 |
| ·apoE不是HCV感染复制所必须的 | 第25-32页 |
| ·成功通过CRISPR/Cas9技术建立Huh dE1.3、Huh dE1.5细胞系 | 第25-30页 |
| ·HuhdE1.3、HuhdE1.5细胞系能够支持HCV复制并产生感染性病毒 | 第30-32页 |
| ·apoE能够与胞外HCV病毒结合 | 第32-34页 |
| ·HCV与apoE在细胞内相结合 | 第32页 |
| ·apoE通过C端结构域与HCV结合 | 第32-34页 |
| ·apoE-HCV病毒颗粒能结合细胞外分泌的apoE | 第34页 |
| ·HCV通过形成E1E2异源二聚体与分泌的apoE结合 | 第34-38页 |
| ·建立HCV E1E2、E1、E2高表达稳定转染细胞系 | 第35-37页 |
| ·HCV E1E2二聚体能够与apoE结合 | 第37-38页 |
| ·HCV E1E2蛋白能够与人血液中的apoE结合 | 第38页 |
| ·分泌型apoE与HCV结合能够改变其感染性 | 第38-41页 |
| ·分泌型apoE通过与HCV结合影响其感染性滴度 | 第38-40页 |
| ·分泌型apoE对HCV感染性的影响具有浓度依赖性 | 第40-41页 |
| ·尝试寻找与apoE结合的膜蛋白片段未成功 | 第41-44页 |
| ·哺乳动物细胞双杂交系统不能寻找与apoE结合的膜蛋白片段 | 第41-43页 |
| ·免疫共沉淀未寻找到与apoE结合的膜蛋白片段 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-49页 |
| 5. 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录Ⅰ 缩略词表 | 第56-57页 |
| 附录Ⅱ 常用溶液配方 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
| 个人简历 | 第64-66页 |
