| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·L-色氨酸概述 | 第7页 |
| ·L-色氨酸的应用 | 第7-8页 |
| ·在医学上的应用 | 第7-8页 |
| ·在食品上的应用 | 第8页 |
| ·在饲料行业的应用 | 第8页 |
| ·L-色氨酸的生产方法 | 第8-9页 |
| ·酶促转化法 | 第8-9页 |
| ·微生物发酵法 | 第9页 |
| ·大肠杆菌L-色氨酸合成途径及调控机制 | 第9-11页 |
| ·中心代谢途径改造在L-色氨酸合成中的运用 | 第11-13页 |
| ·增加E4P的合成的方法 | 第11页 |
| ·增加PEP的合成的方法 | 第11-13页 |
| ·本课题的立题意义与研究内容 | 第13-15页 |
| ·立题意义 | 第13-14页 |
| ·主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·工具酶 | 第15页 |
| ·主要试剂及药品 | 第15-16页 |
| ·主要实验仪器 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第16-17页 |
| ·Escherichia coli K12 染色体的提取 | 第17页 |
| ·csrB和tktA基因以及tac启动子的扩增 | 第17-18页 |
| ·质粒的提取 | 第18页 |
| ·感受态的制备及转化 | 第18页 |
| ·质粒的构建 | 第18页 |
| ·重组菌的构建 | 第18-19页 |
| ·质粒稳定性研究 | 第19页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第19页 |
| ·实时荧光定量PCR检测csrB基因的表达 | 第19-20页 |
| ·培养方法 | 第20-21页 |
| ·生物量的测定方法 | 第21页 |
| ·L-色氨酸的测定 | 第21页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第21-22页 |
| ·副产物的测定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-44页 |
| ·中心代谢途径中强化PEP或E4P合成的分子改造 | 第23-29页 |
| ·PEP合成相关csrB、ppsA基因的克隆及表达 | 第23-25页 |
| ·csrB与ppsA的表达对L-色氨酸合成的影响 | 第25-26页 |
| ·E4P合成基因tktA与tal B的克隆及表达 | 第26-28页 |
| ·tktA与talB的表达对L-色氨酸合成的影响 | 第28-29页 |
| ·共强化PEP和E4P重组菌构建及其发酵特性 | 第29-36页 |
| ·重组质粒pRSF-tac-csrB-tac-tktA、pRSF-tac-csrB-tac-talB的构建及表达 | 第29-31页 |
| ·重组菌的选择及质粒稳定性分析 | 第31-32页 |
| ·碳源对重组菌L-色氨酸合成的影响 | 第32-33页 |
| ·氮源对重组菌L-色氨酸合成的影响 | 第33-35页 |
| ·溶氧对重组菌L-色氨酸合成的影响 | 第35-36页 |
| ·重组菌碳流代谢分析 | 第36-44页 |
| ·重组菌代谢分析 | 第36-39页 |
| ·重组菌的转化率分析 | 第39-41页 |
| ·3L罐中重组菌的代谢分析 | 第41-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
