| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-23页 |
| ·牛支原体病概况 | 第11-19页 |
| ·牛支原体病病原学 | 第11-13页 |
| ·牛支原体病流行病学 | 第13-14页 |
| ·牛支原体病的诊断与防治 | 第14-17页 |
| ·牛支原体基因及蛋白质免疫学相关研究进展 | 第17-19页 |
| ·蛋白组学概述 | 第19-22页 |
| ·蛋白质组学的由来 | 第19-20页 |
| ·蛋白质组学常用技术 | 第20-21页 |
| ·蛋白质组学相关的生物信息学 | 第21-22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·实验材料 | 第23-28页 |
| ·菌株、质粒和宿主菌 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23页 |
| ·实验设备 | 第23-24页 |
| ·实验中主要溶液及其配制 | 第24-28页 |
| ·方法 | 第28-43页 |
| ·牛支原体的培养 | 第28页 |
| ·菌体蛋白的制备 | 第28-29页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第29-30页 |
| ·菌体蛋白双向电泳 | 第30-33页 |
| ·凝胶扫描及软件分析 | 第33页 |
| ·半干转印∕丽春红染色∕Western-blot 鉴定 | 第33-34页 |
| ·MALDI-TOF/ MS 鉴定蛋白 | 第34-35页 |
| ·基因水平验证免疫原性蛋白 | 第35-38页 |
| ·P32 蛋白的表达与纯化 | 第38-42页 |
| ·P32 重组蛋白的Western-blot 鉴定 | 第42页 |
| ·P32 重组蛋白的间接ELISA 实验 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-53页 |
| ·牛支原体全菌蛋白样品的制备及浓度检测 | 第43页 |
| ·等电聚焦电泳不同上样量的电泳结果 | 第43-45页 |
| ·不同固定干胶条pH 范围的电泳结果 | 第45页 |
| ·不同染色方法的电泳结果 | 第45-46页 |
| ·M.bovis 蛋白2-DE 的重复性检测结果 | 第46-47页 |
| ·牛支原体全菌蛋白的 Western blot 检测图形比对结果 | 第47页 |
| ·部分蛋白点的质谱鉴定与数据库检索分析结果 | 第47页 |
| ·免疫相关蛋白 P32 的功能和编码基因分析结果 | 第47-49页 |
| ·免疫原性蛋白的验证 | 第49-53页 |
| ·p32 基因的克隆 | 第49页 |
| ·序列测定结果 | 第49页 |
| ·重组质粒 pET28a-P32 的鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·p32 基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第50页 |
| ·P32 重组蛋白的免疫活性检测 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·牛支原体全菌蛋白双向凝胶电泳技术的建立 | 第53-55页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第53页 |
| ·上样量及固相胶条pH 范围的选择 | 第53-54页 |
| ·染色方法的选择 | 第54页 |
| ·重复性检测 | 第54页 |
| ·目前双向电泳技术存在的不足之处 | 第54-55页 |
| ·2-DE 与Western blot 结合初筛牛支原体免疫原性蛋白 | 第55-56页 |
| ·免疫相关蛋白P32 的克隆、表达及免疫效果研究 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
