黑曲霉β-甘露聚糖酶基因的克隆及其原核和真核表达
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·研究的目的与意义 | 第11页 |
| ·文献综述 | 第11-21页 |
| ·β-甘露聚糖酶 | 第11-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第14-17页 |
| ·丝状真菌表达系统研究进展 | 第17-21页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 2 材料方法 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌种及载体 | 第22页 |
| ·试剂及酶类 | 第22页 |
| ·常用试剂的配制 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要试验仪器 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-33页 |
| ·黑曲霉RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·RNA 的反转录 | 第25页 |
| ·黑曲霉DNA 的提取 | 第25页 |
| ·基因与同源臂的克隆 | 第25-27页 |
| ·MAN 基因在大肠杆菌中的表达 | 第27-30页 |
| ·MAN 基因在毕赤酵母中的表达 | 第30页 |
| ·MAN 基因在黑曲霉中的表达 | 第30-31页 |
| ·重组子的鉴定 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-49页 |
| ·MAN 基因在大肠杆菌中的表达 | 第33-39页 |
| ·黑曲霉RNA 的提取 | 第33页 |
| ·MAN 基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·MAN 基因大肠杆菌表达载体构建 | 第35-36页 |
| ·重组菌株pET-MAN 的诱导表达 | 第36-39页 |
| ·MAN 基因在毕赤酵母的表达 | 第39-43页 |
| ·MAN 基因的扩增 | 第39-41页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第42-43页 |
| ·重组菌株的表达 | 第43页 |
| ·MAN 基因在黑曲霉中的表达 | 第43-49页 |
| ·潮霉素B 筛选浓度的确定 | 第43-44页 |
| ·MAN,Gla5,Gla3 基因的克隆 | 第44-47页 |
| ·黑曲霉表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第48页 |
| ·MAN 重组菌株的筛选和鉴定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| ·重叠延伸PCR 的应用 | 第49页 |
| ·MAN 稀有密码子 | 第49页 |
| ·遗传转化系统的选择 | 第49-50页 |
| ·遗传转化系统的优化 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| ·基因的扩增 | 第51页 |
| ·甘露聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第51页 |
| ·甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第51页 |
| ·甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
