| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1 抗蚜基因与转基因抗蚜作物 | 第11-15页 |
| ·植物凝集素基因 | 第12-14页 |
| ·其他抗蚜基因及方法 | 第14-15页 |
| 2 转基因作物存在的问题及展望 | 第15-17页 |
| ·存在的问题 | 第15-16页 |
| ·展望 | 第16-17页 |
| 3 本研究的目的和内容 | 第17-18页 |
| 第二章 掌叶半夏凝集素基因的克隆 | 第18-30页 |
| 1 材料与方法 | 第18-24页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·主要载体、菌落和试剂 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-24页 |
| ·培养基的配制 | 第18页 |
| ·半夏总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·半夏总RNA中DNA的消化 | 第19-20页 |
| ·cDNA的合成 | 第20页 |
| ·PPA基因引物设计 | 第20-21页 |
| ·基因扩增 | 第21页 |
| ·PCR产物回收 | 第21-22页 |
| ·测序载体链接及大肠杆菌转化 | 第22-23页 |
| ·阳性菌落的鉴定 | 第23页 |
| ·质粒提取与测序 | 第23-24页 |
| ·基因序列比对分析 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-28页 |
| ·掌叶半夏总RNA提取及cDNA合成 | 第24-25页 |
| ·凝集素基因克隆及生物信息学分析 | 第25-28页 |
| 3 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 植物表达载体的构建 | 第30-45页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·基因 | 第30页 |
| ·主要载体、菌株和试剂 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·拟南芥DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·拟南芥韧皮部蛋白启动子及各目的基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·重叠PCR将韧皮部启动子与目的基因进行连接 | 第33页 |
| ·将目的基因连入Gateway入门载体 | 第33-34页 |
| ·将目的基因连入植物表达载体 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-43页 |
| ·拟南芥韧皮部启动子的克隆 | 第35-37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第37-43页 |
| ·含Atpp_2启动子植物表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·目的基因与启动子拼接 | 第37-38页 |
| ·与启动子拼接后的目的基因连入Gateway入门载体 | 第38页 |
| ·pEarleyGate-TW_1载体构建流程及阳性菌落鉴定 | 第38-41页 |
| ·含CaMV35S启动子植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·目的基因连入Gateway入门载体 | 第41页 |
| ·pEarleyGate 101植物表达载体构建流程及阳性菌落鉴定 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 转基因烟草的获得及抗蚜性分析 | 第45-64页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·植物表达载体 | 第45页 |
| ·蚜虫 | 第45页 |
| ·主要菌株和试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·培养基的配制 | 第45页 |
| ·烟草无菌苗的制备 | 第45-46页 |
| ·农杆菌的电击转化 | 第46页 |
| ·农杆菌侵染转化烟草 | 第46-47页 |
| ·烟草根的分化 | 第47页 |
| ·烟草DNA的提取 | 第47页 |
| ·烟草蛋白质的提取 | 第47-48页 |
| ·SDS Loading Buffer的配制 | 第48页 |
| ·Western-blot实验 | 第48-49页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测 | 第49页 |
| ·转基因烟草抗蚜性实验 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-62页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第49-53页 |
| ·农杆菌转化及阳性菌落鉴定 | 第49-51页 |
| ·农杆菌侵染转化烟草 | 第51-53页 |
| ·转基因烟草的鉴定及抗蚜性分析 | 第53-62页 |
| ·转基因烟草PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草激光共聚焦显微镜检测 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草Western-blot鉴定 | 第55-57页 |
| ·转基因烟草抗蚜性分析 | 第57-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 1 主要研究结论 | 第64页 |
| 2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
