半滑舌鳎piwil2和pik3r1基因的克隆与表达分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-14页 |
| 1. 水产生物技术研究背景 | 第10页 |
| 2. 鱼类生殖和发育 | 第10-12页 |
| ·性腺发育 | 第10-11页 |
| ·生殖细胞的发育 | 第11页 |
| ·鱼类精子结构及精子发生研究进展 | 第11-12页 |
| 3 piwil2、pik3r1 的研究进展 | 第12-13页 |
| ·piwil2 基因的结构和研究进展 | 第12页 |
| ·pik3r1 基因的结构和研究进展 | 第12-13页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| 第二章 半滑舌鳎的性别鉴定 | 第14-20页 |
| 1 材料与试剂 | 第14-15页 |
| ·实验材料处理 | 第14页 |
| ·实验器材及试剂 | 第14-15页 |
| 2 实验方法 | 第15-17页 |
| ·遗传性别鉴定 | 第15-17页 |
| ·半滑舌鳎基因组 DNA 提取 | 第15-16页 |
| ·PCR 反应 | 第16页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第16-17页 |
| ·生理性别鉴定 | 第17页 |
| 3 结果分析 | 第17-18页 |
| ·遗传性别 | 第17页 |
| ·生理性别 | 第17-18页 |
| 4 讨论 | 第18-20页 |
| 第三章 半滑舌鳎性腺发育过程 | 第20-25页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| ·采卵及受精卵孵化 | 第20页 |
| ·定期取样与幼苗处理 | 第20-21页 |
| ·试剂和实验器材 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-22页 |
| ·遗传性别鉴定 | 第21-22页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第21-22页 |
| ·PCR 反应 | 第22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| ·石蜡切片 | 第22页 |
| 3 实验结果 | 第22-24页 |
| ·遗传性别鉴定 | 第22-23页 |
| ·生理性别鉴定 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24-25页 |
| 第四章 piwil2 的克隆及表达分析 | 第25-48页 |
| 1 实验材料 | 第25页 |
| 2 试剂和仪器 | 第25-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-38页 |
| ·总 RNA 提取和 cDNA 合成 | 第27-28页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA 合成 | 第28页 |
| ·piwil2 序列验证与全长克隆 | 第28-34页 |
| ·piwil2 的序列验证 | 第28-30页 |
| ·piwil2 的末端扩增 | 第30-34页 |
| ·序列分析 | 第34页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第34-35页 |
| ·piwil2 DNA 启动子区域甲基化检测 | 第35-37页 |
| ·引物设计与性腺 DNA 提取 | 第35页 |
| ·甲基化检测 | 第35-37页 |
| ·染色体定位 | 第37-38页 |
| ·染色体制备 | 第37页 |
| ·piwil2 基因在 BAC 文库中的筛选定位 | 第37页 |
| ·荧光原位杂交 | 第37-38页 |
| 4 实验结果分析 | 第38-46页 |
| ·piwil2 的 cDNA 序列分析 | 第38-39页 |
| ·同源比对和构建进化树 | 第39-41页 |
| ·piwil2 基因 mRNA 表达量分析 | 第41-44页 |
| ·piwil2 基因在成鱼不同组织中的转录水平 | 第41-42页 |
| ·piwil2 基因在成鱼性腺中的转录水平 | 第42-43页 |
| ·piwil2 基因在仔鱼性腺中的转录水平 | 第43-44页 |
| ·piwil2 基因启动子区域甲基化水平的差异 | 第44-45页 |
| ·染色体定位结果 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 pik3r1 基因的克隆与表达分析 | 第48-58页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-51页 |
| ·DNA 提取和性别鉴定 | 第48-49页 |
| ·总 RNA 的提取、cDNA 合成 | 第49页 |
| ·pik3r1 的序列验证与末端扩增 | 第49-51页 |
| ·pik3r1 的序列验证 | 第49-50页 |
| ·pik3r1 末端扩增 | 第50-51页 |
| ·pik3r1 序列分析 | 第51页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第51页 |
| 3 实验结果 | 第51-56页 |
| ·pik3r1 的 cDNA 序列分析 | 第51-53页 |
| ·氨基酸序列比对和进化树 | 第53-54页 |
| ·pik3r1 基因的表达量分析 | 第54-56页 |
| ·pik3r1 基因在成鱼不同组织中的转录水平 | 第54-55页 |
| ·pik3r1 基因在成鱼性腺中的转录水平 | 第55-56页 |
| ·pik3r1 基因在仔鱼性腺中的转录水平 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
