致谢 | 第4-7页 |
摘要 | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第8-12页 |
1.1 玉米穗粒腐病研究现状 | 第8页 |
1.2 正向遗传学研究进展 | 第8-9页 |
1.3 轮枝镰胞菌致病机理研究进展 | 第9页 |
1.4 植物免疫系统研究进展 | 第9-10页 |
1.5 miRNA在植物免疫过程中作用的研究进展 | 第10-12页 |
引言 | 第12-13页 |
第二章 材料与方法 | 第13-26页 |
2.1 实验材料 | 第13-14页 |
2.1.1 植物材料 | 第13页 |
2.1.2 菌株与质粒 | 第13-14页 |
2.2 试剂与仪器 | 第14-16页 |
2.2.1 分子实验所用试剂 | 第14-15页 |
2.2.2 主要仪器 | 第15-16页 |
2.3 引物与探针 | 第16-18页 |
2.4 实验方法 | 第18-26页 |
2.4.1 两个玉米自交系幼苗材料总RNA提取 | 第18页 |
2.4.2 编码蛋白RNA的反转录 | 第18页 |
2.4.3 防御相关基因的RT-qPCR | 第18-19页 |
2.4.4 小RNA测序 | 第19-20页 |
2.4.5 生物信息学分析 | 第20-21页 |
2.4.6 用于RT-qPCR的miRNA反转录 | 第21-22页 |
2.4.7 Northern Blot | 第22-23页 |
2.4.7.1 制备12%尿素-丙烯酰胺胶 | 第22页 |
2.4.7.2 电泳 | 第22页 |
2.4.7.3 转膜和紫外交联 | 第22页 |
2.4.7.4 杂交和探针标记 | 第22-23页 |
2.4.7.5 地高辛探针洗脱、封闭和信号检测 | 第23页 |
2.4.8 Zma-miR408b过表达载体构建 | 第23-24页 |
2.4.9 玉米基因组DNA提取(用于基因型鉴定) | 第24页 |
2.4.10 用于侵染的轮枝镰胞菌孢子液制备 | 第24-25页 |
2.4.11 田间玉米籽粒接种轮枝镰孢菌孢子液 | 第25页 |
2.4.12 玉米离体籽粒对轮枝镰孢菌抗性实验 | 第25-26页 |
第三章 结果与分析 | 第26-44页 |
3.1 两个玉米自交系N6和BT-1BT)表现出明显不同的穗粒腐病抗性 | 第26-27页 |
3.2 小RNA文库测序数据分析 | 第27-31页 |
3.3 玉米籽粒中轮枝镰胞菌应答表达miRNA分析 | 第31-34页 |
3.4 穗粒腐病抗性相关miRNA分析 | 第34-36页 |
3.5 病原菌诱导miRNA参与调控植物-病原体相互作用和激素信号传导途径 | 第36-39页 |
3.6 病原菌诱导表达miRNA下游靶基因分析 | 第39-41页 |
3.7 轮枝镰胞菌响应性miRNA的表达与其靶基因的表达趋势相反 | 第41-42页 |
3.8 Zma-miR408b过量积累显著降低对轮枝镰胞菌的抗性 | 第42-44页 |
第四章 结论与讨论 | 第44-47页 |
参考文献 | 第47-53页 |
英文摘要 | 第53-54页 |
附表 | 第54-83页 |