| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-6页 |
| 英文缩略词表 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 一、牛病毒性腹泻-黏膜病毒研究进展 | 第10-16页 |
| 1 BVDV病原学特性 | 第10-11页 |
| ·发现与命名 | 第10页 |
| ·主要特性 | 第10-11页 |
| 2 BVDV基因组及其特征 | 第11-12页 |
| 3 BVDV的基因分型 | 第12页 |
| 4 BVDV生物型之间转化的机制 | 第12-13页 |
| 5 BVDV的流行概况 | 第13页 |
| 6 BVDV检测方法 | 第13-14页 |
| ·病毒分离 | 第14页 |
| ·RT-PCR技术 | 第14页 |
| 7 国内BVD防控现状 | 第14-15页 |
| 8 国外BVDV疫苗的研制 | 第15-16页 |
| ·传统疫苗 | 第15页 |
| ·新型疫苗 | 第15-16页 |
| 9 小结与展望 | 第16页 |
| 二、PRV重组活载体疫苗株的研究进展 | 第16-19页 |
| 1 PRV概述 | 第16-17页 |
| 2 PRV活载体基因重组疫苗株的构建及应用 | 第17-18页 |
| 3 小结与展望 | 第18-19页 |
| 三、本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 第二章 BVDV/GS01/2010株的分离、鉴定 | 第20-29页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| ·病料来源 | 第20页 |
| ·细胞系、菌种及常用试剂 | 第20-21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-23页 |
| ·病料处理 | 第21页 |
| ·BVDVRNA提取 | 第21页 |
| ·临床样品的RT-PCR检测 | 第21-22页 |
| ·引物设计与合成 | 第21页 |
| ·RT-PCR检测 | 第21-22页 |
| ·BVDV5′-UTR核苷酸序列的生物信息学分析 | 第22页 |
| ·病毒的分离 | 第22页 |
| ·病毒的鉴定 | 第22-23页 |
| ·病毒粒子的电镜观察 | 第22页 |
| ·TCID50的测定 | 第22页 |
| ·本动物回归试验 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| ·临床样品的RT-PCR检测 | 第23页 |
| ·5′-UTR序列的测定及其分析 | 第23-25页 |
| ·病毒分离 | 第25页 |
| ·病毒电镜观察 | 第25-26页 |
| ·TCID50测定 | 第26页 |
| ·本动物回归实验 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 BVDV/GS01/2010流行毒株E2基因的克隆及生物信息学分析 | 第29-37页 |
| 摘要 | 第29页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·毒株及细胞 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-31页 |
| ·E2基因的克隆 | 第30页 |
| ·E2蛋白二级结构及抗原表位的预测 | 第30页 |
| ·E2基因的遗传进化分析 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-35页 |
| ·E2基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·E2蛋白二级结构预测 | 第32页 |
| ·E2蛋白的亲水性分析 | 第32页 |
| ·E2蛋白的表面可能性分析 | 第32-33页 |
| ·E2蛋白抗原表位的预测分析 | 第33页 |
| ·E2基因核苷酸序列同源性比较 | 第33-34页 |
| ·E2基因推导氨基酸同源性分析 | 第34-35页 |
| ·E2基因系统进化树的构建 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 表达BVDVE2基因的重组PRV病毒的构建 | 第37-50页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| ·毒株与细胞系 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-43页 |
| ·引物设计和合成 | 第38-39页 |
| ·PRVBarthaK61疫苗株的细胞增殖及其DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·BVDV/GS01/2010株RNA的提取 | 第40页 |
| ·目的基因的获得 | 第40页 |
| ·pTK-转移载体的构建 | 第40页 |
| ·pTK-/EGFP通用转移载体的构建 | 第40页 |
| ·pTK-/EGFP/E2转移载体的构建 | 第40-42页 |
| ·PRV/gE-/TK-/EGFP/E2重组病毒的构建 | 第42-43页 |
| ·pTK-/EGFP/E2质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·共转染 | 第43页 |
| ·蚀斑筛选 | 第43页 |
| ·PCR鉴定 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| ·目的基因的获得 | 第43-44页 |
| ·pTK-转移载体的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·pTK-/EGFP通用转移载体的鉴定 | 第45-46页 |
| ·pTK-/EGFP/E2转移载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·PRV/gE-/TK-/EGFP/E2重组病毒的筛选 | 第47页 |
| ·PRV/gE-/TK-/EGFP/E2重组病毒的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 导师简介 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
