| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1.前言 | 第13-24页 |
| ·RA 研究进展 | 第13-15页 |
| ·RA 概述 | 第13-14页 |
| ·RA 疫苗的研究 | 第14-15页 |
| ·细菌菌蜕研究进展 | 第15-23页 |
| ·菌蜕的形成 | 第16-17页 |
| ·菌蜕的应用 | 第17-21页 |
| ·菌蜕疫苗 | 第17-18页 |
| ·菌蜕疫苗与细胞免疫 | 第18-19页 |
| ·菌蜕疫苗与粘膜免疫 | 第19页 |
| ·菌蜕作为载体 | 第19-21页 |
| ·菌蜕作为佐剂 | 第21页 |
| ·展望 | 第21-22页 |
| ·本研究的设想 | 第22-23页 |
| ·细胞穿透肽的研究进展 | 第23-24页 |
| ·细胞膜穿透机制 | 第23-24页 |
| ·展望 | 第24页 |
| 2.材料 | 第24-27页 |
| ·菌株和载体 | 第24页 |
| ·工具酶与试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基及缓冲液配置 | 第25-26页 |
| ·仪器 | 第26-27页 |
| 3.方法 | 第27-41页 |
| ·引物的设计 | 第27-28页 |
| ·溶菌盒的改造 | 第28-30页 |
| ·突变 PCR 产物 ΔcI857-rrnB 的扩增 | 第28页 |
| ·溶菌表达质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·溶菌实验 | 第29-30页 |
| ·非质粒依赖型菌蜕制备方法研究 | 第30-34页 |
| ·PCR 扩增 luxS 基因同源臂序列 | 第30页 |
| ·PCR 扩增氯霉素（Cat）抗性片段 | 第30页 |
| ·pUC19-up-ΔcI857-E-rrnB 载体的构建 | 第30-31页 |
| ·pUC19-up-ΔcI857-E-rrnB-down 载体的构建 | 第31页 |
| ·pUC19-up-ΔcI857-E-rrnB-cat-down 载体的构建 | 第31-33页 |
| ·电转感受态的制备 | 第33页 |
| ·大肠杆菌(DE17) LuxS 基因的替换株的构建 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌(DE17) Luxs 基因替换株的溶菌效果验证 | 第34页 |
| ·质粒依赖型菌蜕制备方法研究 | 第34-36页 |
| ·pCP29-ΔcI857-E-rrnB 的构建 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌 BW19851(pCP29-ΔcI857-E-rrnB)溶菌效果验证 | 第35页 |
| ·RA CH3（pCP29-ΔcI857-E-rrnB）的构建 | 第35-36页 |
| ·验证 RA CH3（pCP29-ΔcI857-E-rrnB）的溶菌效果 | 第36页 |
| ·细胞穿透肽 MAP 制备 RA 菌蜕方法研究 | 第36-38页 |
| ·MAP 作用浓度的确定及细菌灭活效率的计算 | 第36-37页 |
| ·MAP 作用制备 CH3 菌蜕 | 第37页 |
| ·电镜观察 MAP 制备的 CH3 菌蜕 | 第37-38页 |
| ·菌体的收集及处理 | 第37页 |
| ·透射电镜（TEM）观察 | 第37-38页 |
| ·RA 菌蜕免疫效果评价 | 第38-41页 |
| ·RA 菌蜕疫苗的制备 | 第38页 |
| ·RA 甲醛灭活苗的制备 | 第38页 |
| ·疫苗的无菌检测 | 第38页 |
| ·免疫实验 | 第38-39页 |
| ·免疫效果评价 | 第39-41页 |
| ·抗体检测 | 第39-40页 |
| ·细胞因子检测 | 第40-41页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第41页 |
| ·攻毒保护试验 | 第41页 |
| 4.结果 | 第41-63页 |
| ·溶菌盒的改造及溶菌效果比较 | 第41-45页 |
| ·溶菌质粒 pUC19- ΔcI857-E-rrnB 的构建 | 第41-43页 |
| ·大肠杆菌溶菌动力学比较 | 第43-44页 |
| ·不同诱导温度对溶菌率的影响 | 第44-45页 |
| ·非质粒依赖型菌蜕制备方法结果 | 第45-49页 |
| ·luxS 同源臂基因及氯霉素基因的克隆 | 第45页 |
| ·缺失载体 pUC19-up-ΔcI857-E-rrnB-cat-down 的构建 | 第45-46页 |
| ·缺失载体 pUC19-up-ΔcI857-E-rrnB-cat-down 的酶切鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·ΔcI857-E-rrnB 溶菌盒对大肠杆菌 DE17 株 luxS 基因的替换结果 | 第47页 |
| ·DE17 (ΔcI857-E-rrnB-cat)的抗性消除 | 第47-48页 |
| ·DE17 (ΔcI857-E-rrnB)溶菌结果 | 第48-49页 |
| ·质粒依赖型菌蜕制备方法结果 | 第49-52页 |
| ·溶菌质粒 pCP29-ΔcI857-E-rrnB 的构建 | 第49-50页 |
| ·BW19851pCP29-ΔcI857-E-rrnB 对大肠杆菌的溶菌效果 | 第50-51页 |
| ·pCP29-ΔcI857-E-rrnB 转化 RA CH3 株 | 第51页 |
| ·pCP29-ΔcI857-E-rrnB 对 RA CH3 株的溶菌效果检测 | 第51-52页 |
| ·利用细胞穿透肽 MAP 制备 RA 菌蜕结果 | 第52-63页 |
| ·确定 MAP 的作用浓度及计算细菌的灭活效率 | 第52-53页 |
| ·利用细胞穿透肽 MAP 制备 RA 菌蜕 | 第53页 |
| ·电镜观察结果 | 第53-54页 |
| ·透视电镜直接观察 | 第53-54页 |
| ·透视电镜超薄切片观察 | 第54页 |
| ·疫苗的制备及无菌检测 | 第54页 |
| ·疫苗免疫效果 | 第54-61页 |
| ·抗体水平检测 | 第54-55页 |
| ·细胞因子检测 | 第55-58页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第58-61页 |
| ·攻毒保护实验 | 第61-63页 |
| 5.讨论 | 第63-67页 |
| 6.结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表论文及奖励 | 第77页 |
